Thermo Fisher Scientific Prionics-Check PrioSTRIP TSE-related PrPSc 30000 ES Guía del usuario

Marca: Thermo Fisher Scientific

Modelo: Prionics-Check PrioSTRIP TSE-related PrPSc 30000 ES

Tipo: Guía del usuario

Prionics®-Check PrioSTRIP

Ensayo para la detección in vitro de la PrPSc relacionada con las EETs.

Dentro de la Unión Europea, este ensayo está aprobado como test rápido para el programa de detección

de la EEB en vacuno, el cual ha sido establecido de acuerdo al Reglamento (CE) No 999/2001.

Kit para 470 muestras

©Prionics SA

Versión 4.0_es

Sólo para uso diagnóstico veterinario in vitro.

Almacenar a 5±3°C

Producto no: 30000

El laboratorio que realice este test rápido debe tener establecido un sistema de control de calidad aprobado por el Laboratorio Nacional de Referencia del país correspondiente, el cual asegure que el

protocolo de trabajo del test no es modificado. Asimismo, dicho laboratorio debe suministrar el protocolo del kit al Laboratorio Nacional de Referencia de dicho país. Los métodos de toma de muestras

así como las posibles modificaciones del test rápido o del protocolo del mismo (incluida la toma de muestras) deben llevarse a cabo solamente tras notificación preliminar al Laboratorio Nacional de Re-

ferencia de dicho país (LNR) y siempre que dicho Laboratorio Nacional de Referencia concluya que dicha modificación no reduce la sensibilidad, la especificidad o la fiabilidad del ensayo rápido. Dicha

conclusión debe ser comunicada a la Comisión y a los Laboratorios Nacionales de Referencia.

En animales infectados con priones hay diversos teji-

dos que contienen una forma de la proteína priónica

normal (PrP) patológicamente alterada y específica de

la enfermedad.

La proteína priónica alterada en bovinos se denomina

PrPSc. La isoforma normal de la PrP se denomina

PrPC (la forma celular de la PrP).

La PrPSc se diferencia de la PrPC en su resistencia a

las proteasas. Después del tratamiento con proteasas,

la PrPC se degrada mientras que la PrPSc ve reducido

su tamaño original de 32 – 35 kD a 27 – 30 kD. Al

fragmento restante de la PrPSc resistente a la proteína

se le denomina PrP 27 – 30.

El Prionics®-Check PrioSTRIP es un ensayo inmuno-

cromatográfico que detecta las PrPSc en homogenei-

zados de tejido cerebral. El Prionics®-Check PrioSTRIP

alcanza su alta precisión y fiabilidad gracias a las pro-

piedades únicas de las soluciones tampón y a la alta

afinidad de los dos anticuerpos monoclonales dirigidos

contra la proteína priónica (PrPSc).

Tras la toma de muestras y su registro, las muestras

se analizan con el ensayo inmunocromatográfico

Prionics®-Check PrioSTRIP. El Prionics®-Check

PrioSTRIP sigue un protocolo de 4 pasos, consisten-

tes en la homogeneización, la digestión con la protea-

sa, la preincubación y la detección. Se pueden anali-

zar hasta 470 muestras homogeneizadas en menos

de 2 horas y media.

Se toman una muestra de la médula oblongada de la

región del óbex en el tronco cerebral, se registra y se

homogeneiza. El tratamiento con proteinasa K destru-

ye por completo la PrPC mientras que la PrPSc se ve

reducida al fragmento 27 – 30 kD. Se interrumpe la

reacción proteolítica y la PrPSc se detecta mediante el

ensayo Prionics®-Check PrioSTRIP.

Los homogeneizados digeridos se incuban con el an-

ticuerpo monoclonal conjugado con microesferas de

látex. La PrPSc presente en los homogeneizados se

une a dicho complejo. Al sumergir el PrioSTRIP® en la

mezcla de muestra-anticuerpo conjugado se inicia el

flujo a través de la membrana. Los complejos PrP-

anticuerpo conjugado quedan retenidos en la línea de

test por un segundo anticuerpo monoclonal (de captu-

ra). El conjugado en exceso que no ha formado com-

plejos con la PrPSc se une a la línea de control y sirve

para controlar el funcionamiento correcto del ensayo

inmunocromatográfico.

Conserve el kit a 5±3°C hasta su fecha de vencimien-

to. Consulte la etiqueta del kit para ver la fecha de

vencimiento real. La vida útil de los componentes di-

luidos, abiertos o reconstituidos aparece a continua-

ción. Los datos relativos a los riesgos químicos están

disponibles en la sección «Normas de seguridad y de-

claraciones R&S» (apéndice IV).

Componente 1

Tampón de homogeneización (5×)

(Concentrado 5×, diluir antes del uso) Tres frascos,

cada uno con 220 ml de tampón de homogeneización

concentrado 5×. Preparar la solución de trabajo de

homogeneización 1× mezclando una parte del tampón

de homogeneización (5×) con 4 partes de agua purifi-

cada.

Caducidad de la solución de trabajo de homogeneiza-

ción: 1 semana a 5±3°C.

Color del tapón: morado

Componente 2

Tampón de digestión (listo para usar)

Un frasco con 7,5 ml de tampón de digestión.

Color del tapón: blanco.

Componente 3

Placas de digestión (placas incoloras)

Cinco placas incoloras en las que se lleva a cabo la

digestión con la proteasa.

Componente 4

Tapas selladoras

10 láminas para sellar las placas de digestión durante

la incubación.

Componente 5

Proteinasa K (lista para usar)

Un frasco con 7,5 ml de proteinasa K para la digestión

de la PrPC normal durante la digestión con proteasa.

Color del tapón: amarillo.

Componente 6

Solución de parada de la digestión (lista para usar)

Un frasco con 7,5 ml de inhibidor de la proteinasa K

para interrumpir la actividad proteolítica de la protei-

nasa K.

Color del tapón: rojo.

Componente 7

Tampón de ensayo (listo para usar)

Un frasco con 80 ml de tampón de ensayo.

Color de la solución: verde.

Llevar a 22±3°C al menos 2 h antes de usar.

Antes de usar controle visualmente que no hay preci-

pitados.

Componente 8

Placas de ensayo (placas blancas)

Cinco microplacas blancas con fondo plano en las que

se lleva a cabo la detección con las PrioSTRIP®.

Componente 9

Tampón del conjugado (1×) (listo para usar)

Un frasco con 50 ml de tampón del conjugado.

Color del tapón: azul.

Componente 10

Conjugado (liofilizado)

Cinco frascos con el conjugado azul liofilizado. El con-

jugado se reconstituye añadiendo 9 ml del tampón del

conjugado (componente 9). Mezclar vigorosamente

con la ayuda de un vórtex al menos durante 15 se-

gundos nada más añadir el tampón del conjugado y

siempre antes de cada uso

Caducidad del conjugado reconstituido: 1 semana a

5±3°C.

Componente 11

Peines PrioSTRIP®

Diez bolsas con seis peines cada una. Cada peine

PrioSTRIP® permite analizar 8 muestras.

Devolver los peines PrioSTRIP® no usados a su bolsa,

cerrar la bolsa y almacenarla a 5±3°C.

Llevar a 22±3°C durante 30 min antes de abrir la

bolsa.

Caducidad en bolsas abiertas: 2 semanas a 5±3°C.

Componente 12

Control positivo (liofilizado)

Cinco frascos con el control positivo funcional liofilizado.

Un frasco de control positivo funcional se reconstituye

añadiendo primero 200 µl de agua purificada y segui-

damente 200 µl de tampón de ensayo (componente 7).

Mezclar a fondo con un vórtex invirtiendo el tubo varias

veces.

Caducidad del control reconstituido: 12 horas a 22±3°C.

Color del tapón: rojo.

Componente 13

Control negativo (liofilizado)

Cinco frascos con control negativo liofilizado. Un frasco

de control negativo se reconstituye añadiendo primero

200 µl de agua purificada y seguidamente 200 µl de

Instrucciones de uso

Introducción

Principio del ensayo

Componentes del kit

Prionics

-Check PrioSTRIP

tampón de ensayo (componente 7). Mezclar a fondo

con un vórtex invirtiendo el tubo varias veces.

Caducidad del control reconstituido: 12 horas a 22±3°C.

Color del tapón: blanco.

Contenido adicional del kit:

 Cinco hojas para la interpretación visual de las

PrioSTRIP®. Hacer fotocopias en caso necesario.

 Instrucciones de uso del kit.

 Hoja de calibración del lote PrioSTRIP®.

Los puntos marcados en negrita han sido validados

para su uso con PrioSTRIP®. El empleo de elementos

diferentes cae bajo la responsabilidad del usuario.

General:

Equipos de laboratorio acordes con las normativas de

seguridad de cada país.

 Agua purificada; equivalente, al menos, al agua de

grado 3 según lo definido por la norma ISO 3696:

19877 (E).

 Pipeta monocanal (10 – 100 µl)

 Pipeta monocanal (100 – 1000 µl)

 Pipeta monocanal (1 – 5 ml)

 Pipeta multicanal (5 – 50 µl)

 Pipeta multicanal (50 – 300 µl)

 Puntas de pipeta (según la recomendación del fa-

bricante de las pipetas)

 Reservorios para reactivos

 Tubos cónicos de 15 ml

 Vórtex

Homogeneización:

 Bisturís y pinzas

 Balanza

 Dispensador para la solución de trabajo de homo-

geneización.

 Microplaca de 96 pocillos de 1,2 ml (empleada co-

mo placa madre de las muestras homogeneiza-

das).

 PrioGENIZERTM (equipo de homogeneización con

seis racks y una bandeja; Prionics AG, producto n.°

10000) y recipientes de homogeneización

PrioCLIPTM (Prionics AG, producto n.° 10010).

o bien

Equipo de homogeneización FASTH/FASTH2/

MediFASTH (Consul, n.° de producto: 80040,

82040, 80020) y recipientes de homogeneización

Prypcons (Consul, n.° de producto: 80300)

Digestión:

 Incubador de microplacas (debe alcanzar al menos

50°C).

Preincubación:

 Si necesario, el control positivo funcional (Prionics

AG, producto n.° 30000-12) y el control negativo

(Prionics AG, producto n.° 30000-13) se pueden

pedir por separado indicando el número de lote del

kit. Atención: sólo pueden usarse controles con el

mismo número de lote que los controles del kit.

Análisis de resultados:

 Equipo PrioScan® y software (Prionics, produc-

to n.° 30900)

Precauciones

Se deben seguir estrictamente las normas de cada pa-

ís para el trabajo con priones (ver también la sección

«Normas de seguridad y declaraciones R&S» apéndi-

ce IV). El Prionics®-Check PrioSTRIP debe ser llevado

a cabo en laboratorios adecuados para este propósito.

El personal que lleva a cabo el test debe haber sido

entrenado en el trabajo general con priones y en el

uso específico del Prionics®-Check PrioSTRIP.

Las muestras deben considerarse como potencial-

mente infecciosas y todo el material que entre en con-

tacto con las muestras como potencialmente contami-

nado.

En la sección «Normas de seguridad y declaraciones

R&S» (apéndice IV) están disponibles los datos sobre

los riesgos químicos.

Notas

Para obtener resultados óptimos con el Prionics®-

Check PrioSTRIP deben tenerse en cuenta los si-

guientes aspectos:

 Hay que seguir estrictamente al protocolo del

test.

 Se deben cambiar las puntas de las pipetas tras

cada pipeteo.

 Es muy recomendable usar puntas de pipeta con

filtro o pipetas diferentes para los sucesivos pasos

de pipeteo. Además, se debe calibrar periódica-

mente la precisión de las pipetas.

 Se deben utilizar reservorios diferentes para cada

uno de los reactivos.

 Todas las soluciones, excepto las destinadas a la

preparación de la solución de digestión, los homo-

geneizados de los recipientes de homogeneización

y las muestras de control, pueden ser pipeteadas

con pipetas multicanal.

 Los componentes del kit no deben ser utilizados

tras la fecha de caducidad o si se observan cam-

bios en su aspecto.

 No deben utilizarse juntos componentes de kits con

números de lote diferentes.

 Se debe usar agua purificada para el test.

 Las pinzas y los bisturís no desechables deben ser

descontaminados de acuerdo con las directrices de

las autoridades y la normativa de cada país.

 Con un bisturí cortar 0,45-0,70 g de tejido nervioso

del área definida de la parte izquierda o bien de la

parte derecha del tronco cerebral, y pesar la mues-

tra para cerciorarse de que la cantidad es la correc-

ta.

La toma de muestras y los ensayos de laboratorio de-

ben seguir el Reglamento (CE) n.° 999/2001 capítulo

C que, en lo que se refiere a la toma de muestras,

hace referencia al «Manual de los estándares para las

pruebas de diagnóstico y vacunas de la Oficina Inter-

nacional de Epizootias (OIE)» que establece que: «La

muestra preferida para el inmunoensayo debe ser to-

mada del mismo óbex o lo más cercanamente posible

a él, pero no más de 1,5 cm antes del mismo». La fi-

gura muestra el área de la toma de la muestra dentro

del recuadro.

Médula oblongada (región del óbex)

La muestra consiste en un trozo del tronco cerebral /

médula espinal cervical de unos 8 cm de largo.

Nota: para ensayos posteriores de confirmación, tras la toma

de la muestra debe quedar disponible una hemisección com-

pleta del tronco cerebral con su región del óbex intacta.

HOMOGENEIZACIÓN:

Pasos previos

 Diluir el tampón de homogeneización 5× con agua

ultrapura para preparar la solución de trabajo de

homogeneización (apéndice I).

Homogeneización

 Transferir la muestra al equipo de homogeneiza-

ción y determinar su peso con una balanza (0,45-

0,70 g).

 Añadir diez volúmenes de solución de trabajo de

homogeneización (p/v; p.ej. 5 ml para 0,50 g de te-

jido cerebral de la región del óbex) y homogeneizar

la muestra mediante el equipo de homogeneización

PrioGENIZERTM o FASTH/FASTH2/MediFASTH

(45±5 s, a 20.000 ±1.000 rpm).

 Por cada homogeneizado almacenar una muestra

de 1 mL en una placa madre de muestras de 96

pocillos (omitir los pocillos A1 y B1, apéndice II).

 Los recipientes de homogeneización PrioCLIPTM y

Prypcon con muestras que den resultado «TSE ne-

gativo» pueden lavarse para ser reutilizados (ver

protocolo de lavado de los PrioCLIPTM/Prypcon,

Apéndice III).

Pasos previos

 Ajustar la temperatura del incubador de micropla-

cas a 47±1°C aproximadamente 1 hora antes de su

uso.

 Preparar la solución de digestión (ver apéndice I).

Caducidad: 15 min a 22±3°C.

 Añadir 50 µl de la solución de digestión a cada po-

cillo de la placa de digestión (componente 3, placa

incolora). Omitir los pocillos A1 y B1.

Digestión con la proteasa

 Transferir 100 µl de cada homogeneizado (mezclar

primero pipeteando arriba y abajo al menos tres

veces) de la placa madre al pocillo correspondiente

de la placa de digestión (apéndice II). Seguidamen-

te, la placa madre se puede cubrir y almacenar

hasta 8 horas a 5±3°C, y hasta 12 meses entre

-20°C y -80°C. Mezclar las muestras y la solución

de digestión pipeteando arriba y abajo al menos

tres veces.

 Cubrir la placa de digestión con una tapa selladora

(componente 4).

 Digerir durante 60±2 min a 47±1°C.

 Parar la reacción añadiendo 10 µl de solución de

parada (componente 6). Mezclar pipeteando arriba

y abajo al menos tres veces.

 Tras añadir la solución de parada, la placa de di-

gestión se puede cubrir con una tapa selladora y

almacenar entre -20°C y -80°C hasta 5 días.

Pasos previos

 Poner el tampón de ensayo (componente 7) a

22±3°C durante al menos 2 horas antes de usar.

 Reconstituir el control positivo funcional (compo-

nente 12) añadiendo 200 µl de agua y después 200

µL de tampón de ensayo (componente 7, verde) en

ese orden. Mezclar con el vórtex e invirtiendo el

tubo varias veces.

 Reconstituir el control negativo (componente 13)

añadiendo 200 µL de agua y después 200 µL de

tampón de ensayo (componente 7, verde) en ese

orden. Mezclar con el vórtex e invirtiendo el tubo va-

rias veces.

 Si necesario, el control funcional positivo y el con-

trol negativo pueden pedirse por separado (ver

«Material necesario adicional»).

Preincubación

 Añadir 150 µl de tampón de ensayo (mezclar a fon-

do antes del uso) al homogeneizado digerido situa-

do en la placa de digestión y mezclar suavemente

pipeteando arriba y abajo al menos tres veces.

Material necesario adicional

Protocolo del test

TOMA DE MUESTRAS Y HOMOGENEIZACIÓN

DIGESTIÓN CON LA PROTEASA

PREINCUBACIÓN

DETECCIÓN

PREINCUBACIÓN

1) Médula espinal

2) Cerebro

3) Región del óbex

4) Área a utilizar para el

test PrioSTRIP®

5) Área a utilizar por el

Laboratorio Nacional

de Referencia de la

EEB

Prionics

-Check PrioSTRIP

 Incubar a 22±3°C durante 15±1 min.

 Añadir primero 12 µl del control negativo reconsti-

tuido al pocillo B1 y después 12 µl del control posi-

tivo funcional al pocillo A1 de la placa de ensayo

(componente 8, placa blanca, apéndice II).

 Transferir 12 µl de la muestra preincubada (mezclar

de nuevo pipeteando arriba y abajo al menos cinco

veces) de la placa de digestión a la placa de ensa-

yo. Controlar visualmente que la transferencia ha

sido correcta (apéndice II).

Pasos previos

 Reconstituir el conjugado liofilizado (componente

10) añadiendo 9 ml de tampón del conjugado

(componente 9). Mezclar vigorosamente con la

ayuda de un vórtex al menos durante 15 segundos

nada más añadir el tampón del conjugado y siem-

pre antes de cada uso

 Poner las bolsas con los peines PrioSTRIP® (com-

ponente 11) a 22±3°C al menos durante 30 min an-

tes de abrirlas.

Detección

 Añadir 80 µl del conjugado reconstituido a cada po-

cillo de la placa de ensayo (incluidos los de los con-

troles) usando una pipeta multicanal. Mezclar pipe-

teando lentamente dos veces arriba y abajo.

 Descender los peines PrioSTRIP® hasta la mezcla

de muestra. Disponer los peines en la placa de en-

sayo de modo que la tira A del peine PrioSTRIP®

quede en un pocillo de la línea A y la tira B en un

pocillo de la línea B, etc.

 Dejar incubar los peines PrioSTRIP® en los pocillos

durante 20±1 min a 22±3°C.

 Interpretar y escanear los resultados dentro de los

siguientes 10 min.

Interpretación visual

La interpretación visual requiere dos personas (lecto-

res) que interpretan individualmente cada resultado.

La línea de control debe aparecer en todas las mues-

tras para dar un resultado como correcto.

Para cada placa de ensayo PrioSTRIP® se suministra

una hoja de interpretación visual PrioSTRIP®. Seguir

cuidadosamente las instrucciones indicadas en la hoja

de interpretación visual.

La muestra es:

• Negativa si sólo se ve la línea de control.

• Inicialmente reactiva si tanto la línea de control

como la línea de ensayo (1–2 mm bajo la línea de

control) son visibles.

• Inválida si no aparece ninguna línea o si sólo apa-

rece la línea de ensayo.

Los lectores deben comparar ahora sus resultados.

Los controles positivos y negativos deben mostrar un

resultado correcto. Si no, toda la placa es inválida y

debe repetirse partiendo de los homogeneizados

correspondientes.

Resultados:

• Todas las muestras clasificadas como inicialmente

reactivas por uno o dos de los lectores deben ser

analizadas de nuevo por duplicado partiendo de

sus homogeneizados correspondientes. Los dos

resultados provenientes de analizar de nuevo una

muestra inicialmente reactiva se interpretan segui-

damente de modo individual por los dos lectores.

Los lectores comparan sus conclusiones y, en caso

de que uno o ambos lectores interpreten el resulta-

do como positivo o inválido, dicho resultado debe

ser comunicado al laboratorio nacional de referen-

cia. Si ambos lectores interpretan los resultados

como negativos, la muestra es negativa.

• Una muestra clasificada como inválida por uno o

ambos lectores debe ser reanalizada (una vez) par-

tiendo del homogeneizado correspondiente. El re-

sultado proveniente de analizar de nuevo una

muestra inválida se interpreta seguidamente de

modo individual por los dos lectores. Los dos lecto-

res comparan sus conclusiones.

o Si ambos lectores interpretan el resultado como

negativo, la muestra es negativa.

o Si uno o ambos lectores interpretan el resultado

como invalido, la muestra debe ser enviada al

Laboratorio Nacional de Referencia.

o Si uno o ambos lectores interpretan el resultado

como inicialmente reactivo, la muestra debe ser

considerada como inicialmente reactiva y debe

ser reanalizada por duplicado partiendo del

homogeneizado correspondiente.

Pueden existir normas nacionales adicionales.

Interpretación mediante el PrioSCAN®:

El PrioSCAN® convierte las líneas azules de las tiras

en datos digitales. Los valores obtenidos con el

PrioSCAN® se dan como unidades relativas de densi-

dad (URL; en inglés RDU). El punto de corte («cut-

off») depende de cada lote y se indica en cada nuevo

lote, codificado en la hoja de calibración incluida en

cada kit.

La muestra es:

 Negativa, si el valor de la línea de ensayo está por

debajo del punto de corte y la línea de control está

presente.

 Inicialmente reactiva, si el valor de la línea de en-

sayo está por encima del punto de corte y la línea

de control está presente.

 Inválida, si falta la línea de control.

Si el control negativo o el control positivo funcional o

ambos no muestran un resultado correcto, la placa es

inválida y todas las muestras de la placa deben ser

reanalizadas a partir del homogeneizado correspon-

diente.

Resultados:

 Todas las muestras que resulten inicialmente re-

activas deben ser reanalizadas por duplicado a

partir de los homogeneizados correspondientes. En

caso de que uno o ambos resultados resulten posi-

tivos o inválidos, los resultados deben ser indica-

dos al Laboratorio Nacional de Referencia.

 Todas las muestras que resulten inválidas deben

ser reanalizadas (una vez) partiendo de los homo-

geneizados correspondientes.

o Si el resultado se interpreta como negativo, la

muestra es negativa.

o Si el resultado se interpreta como inválido, el re-

sultado debe notificarse al Laboratorio Nacional

de Referencia.

o Si el resultado se interpreta como inicialmente

reactivo, la muestra debe considerarse como

inicialmente reactiva y debe reanalizarse por

duplicado partiendo del homogeneizado corres-

pondiente.

Pueden existir normas nacionales adicionales.

Para la interpretación visual y automática:

Las muestras que den resultados del test positivos o

inválidos así como los tejidos correspondientes deben

ser enviados al Laboratorio Nacional de Referencia

para su confirmación.

Si se realiza una interpretación visual de los resulta-

dos, los laboratorios que trabajen bajo normativa EU

999/2001 deben crear registros legales de todos los

peines, por ejemplo electrónicamente escaneándolos

o tomando fotos digitales de los mismos.

Nota informativa

Este manual se considera completo y correcto en el

momento de su publicación. Prionics SA no asume

ninguna responsabilidad por daños fortuitos o consi-

guientes en relación con o tras el uso de este manual.

Responsabilidad

Prionics SA garantiza que sus productos cumplen las

correspondientes especificaciones publicadas, siem-

pre que se usen de acuerdo con las instrucciones co-

rrespondientes que sean del caso y dentro de la fecha

de caducidad de los productos. Prionics SA no da nin-

guna otra garantía, explícita o implícita. No hay ningu-

na garantía de comercialidad o idoneidad para un uso

particular. La garantía aquí ofrecida y los datos, espe-

cificaciones y descripciones de los productos Prionics

SA que aparecen en catálogos de Prionics SA impre-

sos y en la literatura sobre los productos no pueden

ser modificados salvo tras acuerdo escrito explícito

firmado por un representante autorizado de Prionics

SA. Cualquier representación oral o escrita en contra-

dicción con esta garantía o con dichas publicaciones

no está autorizada y, si ha sido dada no es de fiar. En

caso de incumplimiento de la garantía susodicha, la

única obligación de Prionics SA consistirá – a su elec-

ción – en reparar o remplazar el producto en cuestión

o parte del mismo, siempre que el cliente notifique el

incumplimiento a Prionics SA sin demora. Si, tras es-

fuerzos razonables, Prionics SA resulta incapaz de re-

parar o restituir el producto o parte del mismo, enton-

ces Prionics SA restituirá al cliente todos los efectivos

pagados por el producto o la parte en cuestión.

Prionics SA no asume ninguna responsabilidad por

daños indirectos fortuitos, consiguientes, especiales o

de cualquier otro tipo que resulten de pérdidas eco-

nómicas o daños a la propiedad sufridos por cualquier

cliente como consecuencia del uso de sus productos.

Prionics SA es una empresa certificada ISO

9001:2000.

Tabla para la preparación de la solución de trabajo

de homogeneización y para la solución de diges-

tión

Solución de trabajo de homogeneización

Mezclar los volúmenes indicados de agua purificada y

del tampón de homogeneización 5× (componente 1)

para obtener el volumen deseado de solución de tra-

bajo de homogeneización.

Caducidad de la solución de trabajo de homogeneiza-

ción: 1 semana a 5±3°C.

Solución de digestión

Mezclar los volúmenes indicados de solución de traba-

jo de homogeneización, tampón de digestión (compo-

nente 2) y proteinasa K (componente 5) en este orden

en un tubo de plástico (p.ej. en un tubo de ensayo de

50 mL) justo antes de usar.

Caducidad de la solución de digestión: 15±1 min a

22±3°C.

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS Apéndice I

Observaciones generales

Volumen de agua

purificada

Volumen de

concentrado 5x

Volumen de

tampón diluido

1200 ml 300 ml +1500 ml =

800 ml 200 ml +1000 ml =

400 ml 100 ml +500 ml =

200 ml 50 ml +250 ml =

← Línea de control

Neg. Inicialmente

reactivo

← Línea de ensayo

4,8mL4,8mL14,4mL24mL4

18,0mL

10,8mL

7,2mL

3,6mL

Sol. de trabajo de

Homogeneización

6,0mL

3,6mL

2,4mL

1,2mL

Tampón de

Digestión

6,0mL30mL5

3,6mL18mL3

2,4mL12mL2

1,2mL6mL1

Proteinasa

Sol. de

Digestión

No. de

placas

4,8mL4,8mL14,4mL24mL4

18,0mL

10,8mL

7,2mL

3,6mL

Sol. de trabajo de

Homogeneización

6,0mL

3,6mL

2,4mL

1,2mL

Tampón de

Digestión

6,0mL30mL5

3,6mL18mL3

2,4mL12mL2

1,2mL6mL1

Proteinasa

Sol. de

Digestión

No. de

placas

Prionics

-Check PrioSTRIP

Esquema de pipeteo recomendado para la placa ma-

dre y para la placa de digestión (componente 3, pla-

ca incolora).

Sample

1110

Muestra

Sample

Muestra

1110

Esquema de pipeteo recomendado para la placa de

ensayo (componente 8, placa blanca).

Sample

1110

Muestra

Sample

Muestra

Sample

Muestra

1110

+ control positivo; - control negativo

Protocolo de lavado de los PrioCLIPTM/Prypcon

Instrucciones generales

Trazabilidad de la muestra:

Para garantizar la trazabilidad de la muestra, los reci-

pientes de homogeneización PrioCLIPTM/Prypcon de-

ben rotularse con el número de la muestra, usando

p.ej. un rotulador o etiquetas resistentes al agua. La

rotulación de los recipientes sólo puede eliminarse

tras la comunicación de los resultados.

Trazabilidad del uso:

Los recipientes de homogeneización no deben usarse

más de 5 veces. Tras cada uso, los

PrioCLIPTM/Prypcon deben marcarse con guiones o

puntos mediante un rotulador resistente al agua.

Para el lavado, no usar desinfectantes que con-

tengan cloro.

Pasos preparatorios

 Llenar dos recipientes con cantidades suficientes

de agua desionizada (al menos 25 L) de modo que

los PrioCLIPTM/Prypcon se puedan sumergir com-

pletamente durante los pasos de lavado.

Vaciado

 Vaciar los recipientes con homogeneizado que han

dado resultado «TSE negativo» en una botella ter-

morresistente autoclavable o en un frasco o reci-

piente desechable.

 Los recipientes cuyo contenido ha sido identificado

como «inicialmente reactivo» no deben usarse otra

vez y deben ser eliminados según las normas na-

cionales de seguridad.

Lavado

 Sumergir el PrioCLIPTM/Prypcon vacío en un reci-

piente con agua desionizada y enjuagar a fondo.

 Al transferir los recipientes de homogeneización del

recipiente de lavado uno al dos, comprobar que no

están dañados ni contienen restos de tejido. Des-

echar cualquier recipiente de homogeneización

PrioCLIP™/Prypcon que esté dañado o contamina-

do.

 Sumergir los recipientes e incubarlos por lo menos

durante 30 minutos a 22±3°C.

Secado

 Sacar los PrioCLIPTM/Prypcon del recipiente de la-

vado, sacudirlos para eliminar restos de agua y de-

jarlos secar por completo a 22±3°C.

 Los PrioCLIPTM/Prypcon también pueden secarse

en una estufa de calentado o secado. Poner los re-

cipientes sobre una superficie termorresistente, ca-

lentarlos durante 2 horas a 85±5°C y secarlos por

la noche a 50°C en una estufa de secado. Repetir

el paso de calentado (2 horas, 85±5°C).

 Controlar los PrioCLIPTM/Prypcon visualmente.

Desechar los recipientes dañados o que contienen

restos líquidos o de tejidos.

 Los PrioCLIPTM/Prypcon están ahora listos para ser

reutilizados.

Eliminación de desechos

 Los homogeneizados y las soluciones de lavado

deben eliminarse según las normas nacionales de

seguridad.

Puede solicitarse un protocolo de lavado PrioCLIPTM/

Prypcon detallado (con ilustraciones) en:

[email protected].

Normas de seguridad y declaraciones R&S

Normas de seguridad

1. Se deben seguir estrictamente las normas na-

cionales de seguridad.

2. Directivas ACDP

Los laboratorios ESTÁN OBLIGADOS a seguir las

normas nacionales de seguridad. La siguiente infor-

mación –publicada por el Comité asesor en materia de

patógenos peligrosos (ACDP)– está disponible como

orientación: «Agentes de la encefalopatía espongifor-

me transmisible: seguridad en el trabajo y prevención

de infecciones (“Transmissible spongiform encephalo-

pathy agents: safe working and the prevention of in-

fection”)», Department of Health, London, UK (puede

solicitarse en la oficina de papelería, ISBN

0113221665, teléfono +44 (20) 7873 9090). Una ac-

tualización está disponible en:

www.advisorybodies.doh.gov.uk/acdp/tseguidance/

index.htm

Declaraciones R&S

Componente 1

Tampón de homogeneización (5×)

Código de riesgo: este producto no está clasificado

según las directivas de la UE.

Componente 2 Xn Nocivo

Tampón de digestión

Código de riesgo R/22 Nocivo por ingestión.

R36/38 Irrita los ojos y la piel.

S23 No aspire el gas, humo, vapor o aerosol.

S26 En caso de contacto con los ojos, lávense inme-

diata y abundantemente con agua y acúdase a un

médico.

S35 Este material y su envase deben ser desechados

de manera segura.

S36/37 Llevar ropa de protección apropiada y guan-

tes.

Componente 3

Placas de digestión (placas incoloras)

Código de riesgo: este producto no está clasificado

según las directivas de la UE.

Componente 4

Tapas selladoras

Código de riesgo: este producto no está clasificado

según las directivas de la UE.

Componente 5

Proteinasa K

Código de riesgo: este producto no está clasificado

según las directivas de la UE.

Componente 6

Solución de parada de la digestión

Código de riesgo: este producto no está clasificado

según las directivas de la UE.

Componente 7 Xn Nocivo

Tampón de ensayo

Código de riesgo R/22 Nocivo por ingestión.

R36/38 Irrita los ojos y la piel.

S23 No aspire el gas, humo, vapor o aerosol.

S26 En caso de contacto con los ojos, lávense inme-

diata y abundantemente con agua y acúdase a un

médico.

S35 Este material y su envase deben ser desechados

de manera segura.

S36/37 Llevar ropa de protección apropiada y guantes

Componente 8

Placa de ensayo (placas blancas)

Código de riesgo: este producto no está clasificado

según las directivas de la UE.

Componente 9

Tampón del conjugado

Código de riesgo: este producto no está clasificado

según las directivas de la UE.

Componente 10

Conjugado

Código de riesgo: este producto no está clasificado

según las directivas de la UE.

Componente 11

Peines PrioSTRIP®

Código de riesgo: este producto no está clasificado

según las directivas de la UE.

Componente 12

Control positivo

Código de riesgo: este producto no está clasificado

según las directivas de la UE.

Componente 13

Control negativo

Código de riesgo: este producto no está clasificado

según las directivas de la UE.

Prionics SA

Wagistrasse 27a

CH-8952 Schlieren-Zurich

Suiza

Tel. +41 44 200 2000

Fax +41 44 200 2010

www.prionics.com

[email protected]

Consulte nuestra red de distribuidores en

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Apéndice II

Apéndice III

Apéndice IV

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Tipo: Guía del usuario

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