Thermo Fisher Scientific PrioCHECK PRV gB serum pig 7589100 ES Guía del usuario

Marca: Thermo Fisher Scientific

Modelo: PrioCHECK PRV gB serum pig 7589100 ES

Tipo: Guía del usuario

PrioCHECK

PRV gB

ELISA para la detección in vitro de anticuerpos dirigidos contra el virus de la Pseudorabia (enfermedad de Aujeszky) en

suero porcino

5 placas para 450 muestras

Prionics AG

Versión 1.0_es

Sólo para diagnóstico in vitro en uso veterinario

Guardar de 5±3°C

Nº de producto 7589100

Introducción

El virus de la Pseudorabia porcina (PRV), también

conocido como virus de la enfermedad de Aujeszky,

es un alfa herpes virus que produce una infección

altamente contagiosa con un impacto económico

importante sobre la industria porcina. Puede provocar

una gran variedad de síntomas clínicos tales como

trastornos del sistema nervioso, enfermedades respi-

ratorias, fallas reproductivas e incluso muerte. Prio-

CHECK

PRV gB detecta anticuerpos dirigidos contra

la glicoproteína B (gB) del PRV en suero de cerdos

infectados. La glicoproteína B (=gII: nomenclatura

anterior) es uno de los componentes más importantes

de la envoltura viral, la cual es indispensable para la

infección y para obtener anticuerpos neutralizantes.

PrioCHECK

PRV gB es un ensayo extremadamente

sensible y específico para detectar cerdos infectados

con diferentes virus silvestres y para detectar cerdos

inmunizados con vacunas convencionales o marcado-

ras.

PrioCHECK

PRV gB para la detección de anticuer-

pos dirigidos contra el virus de la Pseudorabia (PRV)

en suero de cerdos, puede utilizarse para:

- Monitorear el estado de piaras libres de PRV.

- Detectar anticuerpos contra PRV después de una

inmunización con vacunas convencionales o mar-

cadoras.

- Controlar el nivel de anticuerpos contra PRV en

cerdos después de su vacunación.

- Diagnósticos individuales y poblacionales.

Principio del ensayo

PrioCHECK

PRV gB es una ELISA bloqueadora que

detecta anticuerpos (A) contra el virus de la pseudora-

bia. En el caso de una muestra positiva, la reacción

entre un epitope, situado en la glicoproteína B (gB) del

PRV, y un anticuerpo monoclonal específico (AMc) se

bloquea con anticuerpos específicos presentes en la

misma.

El kit provee una placa de microtitulación recubierta

con antígeno no infeccioso de PRV. Para llevar a cabo

el ensayo, se agrega suero porcino sin diluir a los

pocillos de la placa, la cual se incuba durante una

hora a 37±1°C o a temperatura ambiente (22±3°C).

Después de los lavados se agrega el conjugado AMc-

HRPO a la placa y se vuelve a incubar durante una

hora a 37±1°C o a 22±3°C. Una vez finalizada la

incubación, se procede al lavado de la placa y al

agregado de sustrato cromógeno (TMB). Después de

20 minutos, se detiene el desarrollo de color añadien-

do la solución de frenado y se mide la densidad óptica

(DO) a 450 nm.

Componentes del kit

Conserve el kit refrigerado (5±3°C) hasta la fecha de

vencimiento. Consulte la etiqueta del kit para ver la

fecha de caducidad real. La vida útil de los componen-

tes diluidos, abiertos o reconstituidos se detalla a

continuación, cuando corresponda. Tiene a su dispo-

sición los datos relativos a los riesgos químicos en la

sección "Normas y declaraciones de seguridad"

(Anexo II).

Componente 1

Placa del ensayo

Cinco placas de ensayo con una bolsa de desecante

envasadas al vacío.

Componente 2

Conjugado (30x)

(Concentrado 30X, diluir antes de usar)

Un vial con 2,5 ml de conjugado.

El conjugado diluido es inestable, prepárelo inmedia-

tamente antes de usar.

Componente 3

Tampón de dilución (listo para usar)

Un vial con 60 ml de tampón de dilución.

Componente 4

Líquido de lavado (200X)

(Concentrado 200X, diluir antes de usar) Un vial con

60 ml de líquido de lavado.

Vida media de la solución de lavado: una semana a

22±3°C.

Componente 5

Agua desmineralizada

Un vial con 10 ml de agua desmineralizada.

Componente 6

Suero equino (liofilizado)

Un vial con 6,0 ml de suero equino liofilizado.

El suero equino reconstituido puede almacenarse a

-20°C hasta su fecha de vencimiento.

Componente 7

Suero de referencia 1 (listo para usar)

Un vial con 2,5 ml de suero de referencia 1.

Componente 8

Suero de referencia 2 (listo para usar)

Un vial con 2,5 ml de suero de referencia 2.

Componente 9

Suero de referencia 3 (listo para usar)

Un vial con 2,5 ml de suero de referencia 3.

Componente 10

Sustrato Cromógeno (TMB) (listo para usar)

Un vial con 60 ml de sustrato cromógeno (TMB).

Componente 11

Solución de frenado (listo para usar)

Un vial contiene 60 ml de tampón de solución de

frenado.

Contenido adicional del kit:

- Instrucciones de uso

- 10 selladores de placas

- Certificado de análisis

Material adicional necesario

General:

Equipo de laboratorio según las normas de seguridad

nacionales.

Incubación:

Incubador de Microplacas (que kçalcance al menos

los 50°C).

Análisis de los resultados:

Lector de placas, p. ej., Multiscan EX o equivalente.

El lector tiene que tener un filtro apropiado para leer

placas a 450 nm.

Opcional:

Lavador de placas p. ej., Tecan EIA Tray

Washer o equivalente.

Procedimiento del ensayo

Precauciones

Debe seguir estrictamente a las normas nacionales

para el trabajo con muestras animales. PrioCHECK

PRV gB debe usarse en laboratorios adecuados para

este propósito.

Las muestras deben ser consideradas como poten-

cialmente infecciosas y todos los objetos que entren

en contacto con las mismas, como potencialmente

contaminados.

Tiene a su disposición los datos relativos a los riesgos

químicos en la sección "Normas y declaraciones de

seguridad" (Anexo II).

Notas

Para lograr unos resultados óptimos PrioCHECK

PRV gB, debe tener en cuenta lo siguiente:

 Debe seguir estrictamente el protocolo del

ensayo.

 Todos los reactivos del kit deben equilibrarse a

temperatura ambiente (22±3°C) antes de usarse.

 Debe cambiar las puntas de las pipetas después de

cada uso.

 Utilice recipientes diferentes para cada reactivo.

 Los componentes del kit no deben ser utilizados

tras la fecha de caducidad o si se observan cam-

bios en su aspecto.

 No debe utilizar componentes con diferentes

números de lote al mismo tiempo.

 Utilice agua desmineralizada durante el ensayo.

SOLUCIONES QUE DEBE TENER PREPARADAS

Suero equino

Reconstituya

el suero equino (Componente 6) con 6

ml agua desmineralizada (Componente 5). El suero

equino reconstituido se puede guardar a -20°C hasta

su fecha de vencimiento.

Tampón de ELISA

Mezcle 1 volumen de suero de caballo reconstituido

con 9 volúmenes de tampón de dilución (Componente

3) (la concentración final de suero equino en el tam-

pón de ELISA debe ser del 10%).

Utilice un tampón nuevo cada vez que realice el

ensayo. Por lo tanto, prepare sólo la cantidad de

tampón de ELISA que sea necesaria para el ciclo de

ensayos (11 ml por placa).

Dilución del Conjugado

Prepare la dilución del conjugado (30x) (Componente

2) 1/30 en tampón de ELISA. El ensayo requiere 11 ml

por placa.

La reconstitución de reactivos liofilizados debe hacerse del siguiente

modo:

- Equilibre el vial a 22±3°C.

- Con el vial en posición vertical, golpéelo con cuidado contra la mesa

para asegurarse de que el contenido esté en el fondo del vial.

- Abra el vial.

- Agregue la cantidad necesaria de agua desmineralizada.

- Cambie el tapón del vial y gírelo con cuidado de modo que el material

seco que quede se disuelva.

- Deje el material liofilizado en reposo a 22±3°C d urante 15 minutos.

- Invierta el vial con cuidado de vez en cuando (evite la formación de

espuma).

Instrucciones de uso

PrioCHECK

PRV gB

Nota: debe preparar la dilución de trabajo justo

antes de usarla.

Líquido de lavado

El líquido de lavado (200x) (Componente 4) debe

diluirse 1/200 en agua desmineralizada y es suficiente

para un volumen final de 12 litros.

Estabilidad de la solución de lavado: 1 semana a

22±3°C.

Nota: Utilice lavadoras de ELISA comerciales. Si no tiene una a

su disposición, agregue 200 a 300 µl de solución de lavado a

todos los pocillos. Después, vacíe la placa y repita el proceso

las veces necesarias. No es necesario remojar la placa entre

lavados. Golpee bien la placa después del último lavado.

INCUBACIÓN DEL SUERO

1.1 Agregue 100 µl de suero de referencia 1 (Com-

ponente 7) a los pocillos A1 y B1.

1.2 Agregue 100 µl de suero de referencia 2 (Com-

ponente 8) a los pocillos C1 y D1.

1.3 Agregue 100 µl de suero de referencia 3 (Com-

ponente 9) a los pocillos E1 y F1.

1.4 Agregue 100 µl de muestra al resto de pocillos.

1.5 Selle la placa y agítela con cuidado.

1.6 Incube durante 60±5 minutos a 37±1°C (o a

22±3°C).

INCUBACIÓN CON EL CONJUGADO

2.1 Después del periodo de incubación, vacíe la

placa y lávela 6 veces con 200 a 300 µl líquido

de lavado. Golpéela bien después del último la-

vado.

2.2 Agregue 100 µl de conjugado diluido a todos los

pocillos.

2.3 Selle la placa y agítela con cuidado.

2.4 Incube durante 60±5 minutos a 37±1°C (o a

22±3°C).

INCUBACIÓN CON SUSTRATO CROMÓGENO

(TMB)

3.1 Luego del período de incubación, vacíe la placa

y lávela 6 veces con 200 a 300 µl solución de la-

vado. Golpee bien la placa después del último

lavado.

3.2 Agregue 100 µl de sustrato cromógeno (TMB)

(Componente 10) a todos los pocillos.

3.3 Incube 20 minutos a 22±3°C.

3.4 Agregue 100 µl de solución de frenado

(Componente 11).

Mezcle el contenido de los pocillos de la placa.

Nota: Agregue la solución de frenado 20 minutos

después de haber llenado el primer pocillo con sustra-

to cromógeno (TMB). Agregue la solución de frenado

en el mismo orden y lugar en que agregó el sustrato

cromógeno (TMB).

LECTURA DEL ENSAYO Y CÁLCULO DE LOS

RESULTADOS

4.1 Mida la densidad óptica (DO) de los pocillos a

450 nm, si es posible, antes de que pasen 15

minutos, pero no más de 60, desde que finalice

el desarrollo de color.

4.2 Calcule la media de los pocillos E1-F1 (=DO

450

máxima).

4.3 La inhibición porcentual (IP) de los sueros de

referencia y de los sueros del ensayo se calcula

según la siguiente fórmula.

Nota: Los valores DO

450

de las muestras se expresan

como la inhibición porcentual relativa a la DO

450

máxima.

450

muestra

PI = 100 - ---------------------------------------- x 100

450

máx.

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

Criterios de validación

5.1 La DO

450

máxima media debe ser al menos

1,000.

5.2 La inhibición porcentual media del suero de

referencia 1 debe ser >50%.

5.3 La inhibición porcentual media del suero de

referencia 2 debe ser <50%.

5.4 Si no se cumplen estos criterios, deben descar-

tarse los resultados del ensayo.

Nota: Si la DO

450

máxima media es inferior a 1,000,

es posible que el sustrato cromógeno (TMB) esté

demasiado frío. En ese caso, caliente la solución

hasta 22±3°C o incube durante 30 minutos.

Interpretación de la inhibición porcentual

PI = ≥ 50% (positivo)

La muestra contiene anticuerpos específicos contra

PRV gB .

IP = < 50% (negativo)

La muestra no contiene anticuerpos específicos contra

PRV gB.

Anexo I

Nota informativa

Este manual se considera completo y correcto en el

momento de su publicación. Prionics AG no asume

ninguna responsabilidad por incidencias o daños

relacionados por el uso de este manual

Responsabilidad

Prionics AG garantiza que sus productos cumplen las

correspondientes especificaciones publicadas, siem-

pre que se usen de acuerdo con las instrucciones

correspondientes que sean del caso y dentro de la

fecha de caducidad de los productos. Prionics AG no

da ninguna otra garantía, explícita o implícita. No hay

ninguna garantía de comercialidad o idoneidad para

un uso particular. La garantía aquí ofrecida y los

datos, especificaciones y descripciones de los produc-

tos Prionics AG que aparecen en catálogos de Prio-

nics AG impresos y en la bibliografía sobre los produc-

tos no pueden ser modificados salvo tras acuerdo

escrito explícito firmado por un representante autori-

zado de Prionics AG. Cualquier reproducción oral o

escrita en contradicción con esta garantía o con

dichas publicaciones no está autorizada y Prionics no

se hace responsable.

En caso de incumplimiento de la garantía susodicha,

la única obligación de Prionics AG consistirá, a su

elección, en reparar o remplazar el producto en

cuestión o parte del mismo, siempre que el cliente

notifique el incumplimiento a Prionics AG sin demora.

Si, tras esfuerzos razonables, Prionics AG resulta

incapaz de reparar o restituir el producto o parte del

mismo, entonces Prionics AG restituirá al cliente todos

los efectivos pagados por el producto o la parte en

cuestión.

Prionics AG no asume ninguna responsabilidad por

daños indirectos fortuitos, consiguientes, especiales o

de cualquier otro tipo que resulten de pérdidas eco-

nómicas o daños a la propiedad sufridos por cualquier

cliente como consecuencia del uso de sus productos.

Prionics AG y Prionics Lelystad B.V. son empresas

certificadas ISO 9001:2000.

Anexo II

Normas y declaraciones de seguridad

1. Se deben seguir estrictamente las normas

nacionales de seguridad.

Declaraciones de seguridad

Componente 1

Placa de ensayo