Thermo Fisher Scientific PrioCHECK Porc. Salmonella Ab 2.0 Strip Kit Instrucciones de operación

Marca: Thermo Fisher Scientific

Modelo: PrioCHECK Porc. Salmonella Ab 2.0 Strip Kit

Categoría: Lavadoras

Tipo: Instrucciones de operación

Sólo para uso veterinario. Sólo para uso In Vitro.

INSTRUCCIONES DE USO

PrioCHECK™ Porc. Salmonella Ab 2.0 Strip Kit

ELISA para detección

in vitro

de anticuerpos contra

Salmonella

en plasma y suero de cerdo

Número de Catálogo

7610660 N.º de Pub. MAN0013916 Rev. B

¡ADVERTENCIA! Lea las hojas de datos de seguridad (SDS) y siga las instrucciones de manipulación. Lleve el equipo de protección individual

(EPI) adecuado (gafas, ropa, guantes). Las hojas de datos de seguridad (SDS) se encuentran disponibles en thermofisher.com/support.

¡ADVERTENCIA! POSIBLE RIESGO BIOLÓGICO. Lea la información sobre seguridad frente a los riesgos biológicos en la página de este producto

en thermofisher.com. Lleve el equipo de protección individual (EPI) adecuado (gafas, ropa, y guantes)

Introducción

La salmonelosis es una de las enfermedades zoonóticas más importantes y causa serios síntomas clínicos en los seres humanos. Los cerdos han sido

identificados como una fuente importante de esta Salmonella. Las piaras especialmente infectadas constituyen un riesgo para la salud pública en tanto son

una fuente de contaminación de la carne producida en mataderos. Puede lograrse fácilmente una vigilancia y un diagnóstico de piaras infectadas haciendo

un ensayo de anticuerpos para Salmonella en suero o jugo de carne. Applied Biosystems™ PrioCHECK™ Porc. Salmonella Ab 2.0 Strip Kit se origina en el

Instituto Danés de Veterinaria (Nielsen et al., 1995) y ha sido aplicado con éxito en el programa de control de Salmonella en cerdos de Dinamarca.

Adicionalmente suele usarse el ELISA como criterio de referencia en el desarrollo de otros ELISA para Salmonella [1].

PrioCHECK™ Porc. Salmonella Ab 2.0 Strip Kit puede usarse para detectar la infección en cerdos causada por cepas de Salmonella pertenecientes al grupo

sérico B, C1 y D (los serotipos más comunes aislados en Europa, Asia y América). El ensayo es adecuado para detección a gran escala y para su aplicación

en programas de control de infecciones por Salmonella en cerdos [1,2].

Principio del ensayo

PrioCHECK™ Porc. Salmonella Ab 2.0 Strip Kit es un ELISA indirecto para la detección de anticuerpos anti-Salmonella en cerdos y detecta anticuerpos

contra los antígenos O: 1, 4, 5, 6, 7 y 12 del polisacárido (LPS) de Salmonella. Las placas están recubiertas con LPS purificado aislado de S. Typhimurium y

S. Choleraesuis. El conjugado es suero de cerdo anti-conejo acoplado a peroxidasa de rábano picante.

Las muestras del ensayo son pre-diluidas en una placa de dilución y transferidas a los correspondientes pocillos de la lámina de ensayo e incubadas a

temperatura ambiente (22±3°C). Posteriormente, las placas se lavan y se añade el conjugado HRPO y se incuba a 22±3°C. Después de que las placas fueron

lavadas, el sustrato cromogénico (TMB) listo para usar se distribuye a todos los pocillos de la placa de ensayo. Después de la incubación a 22±3°C, el

desarrollo de color se detiene y se mide a 450 nm.

Componentes del kit

Kit de 5 placas para 450 muestras. Almacenar el kit a 5±3°C hasta la fecha

de vencimiento. Ver fecha de vencimiento actual en la etiqueta del kit.

La vida útil de los componentes diluidos, abiertos o reconstituidos, se

indica a continuación, cuando corresponda.

Componente

Descripción

1: Placa de ensayo

Cinco placas de ensayo

2: Conjugado (30x)

30x concentrado, diluir antes de usar. Un

vial que contienen 2.2 mL de conjugado. Vida

útil de conjugado diluido: 24 horas a 22±3°C.

3: Tampón de dilución (5x)

5x concentrado, diluir antes de usar. Un

vial que contiene 60 mL de tampón de

dilución. Vida útil de solución de trabajo del

tampón de dilución: 24 horas a 22±3°C.

4: Líquido de lavado (100x)

100x concentrado, diluir antes de usar.

Cuatro viales que contienen 60 mL de

líquido de lavado. Vida útil de líquido de

lavado: 1 semana a 22±3°C.

5: Control negativo

Listo para usar. Un vial que contiene

0.5 mL de control negativo.

6: Control de validación

Listo para usar. Un vial que contiene

0.5 mL de control de validación.

Nota: El uso de este control es opcional.

7: Control positivo

Listo para usar. Un vial que contiene

0.5 mL de control positivo.

8: Sustrato cromogénico (TMB)

Listo para usar. Un vial que contiene 60 mL

de sustrato cromogénico (TMB).

9: Solución de frenado

Listo para usar. Un vial que contiene 60 mL

de solución de frenado.

Contenido adicional del kit

Instrucciones de uso

Material adicional requerido

A menos que se indique lo contrario, todos los materiales están disponibles

en thermofisher.com.

Uso

Descripción

Placas de

dilución

Placas de dilución para hacer pre-diluciones de muestras de

plasma y suero. Recomendamos placas con fondo en forma de

U (N.º de Cat. 267245).De todas maneras, pueden usarse

también otras placas o tubos no obligatorios.

General

Equipamiento de laboratorio conforme a normas de seguridad

nacionales.

Análisis de

resultados

Lector de placa. El lector debe tener un juego de filtros

apropiado para leer las placas a 450 nm.

Opcional

Lavadora de placas.

Método del ensayo

Prevenciones

• Se deben seguir estrictamente las normas nacionales de seguridad.

• PrioCHECK™ Porc. Salmonella Ab 2.0 Strip Kit debe usarse en

laboratorios adecuados para este propósito.

• Las muestras deben ser consideradas como potencialmente infecciosas

y todos los artículos que entren en contacto las muestras como

potencialmente contaminados.

Notas

Para lograr óptimos resultados con PrioCHECK™ Porc. Salmonella Ab 2.0

Strip Kit deben tomarse en cuenta los siguientes aspectos:

• El protocolo de método del ensayo debe ser seguido estrictamente.

• Se recomienda el uso de 6 tiempos de lavado, si el ensayo se realiza en

un sistema robótico.

• Todos los reactivos del kit deben equilibrarse a temperatura ambiente

(22±3°C) antes de su uso.

• Las puntas de pipeta tienen que ser cambiadas para cada paso de

pipeteado.

• Para cada reactivo deben usarse depósitos de solución separados.

• Los componentes del kit no deben usarse después de su fecha de

vencimiento o si se observan cambios en su apariencia.

• Los componentes del kit de distinto número de lote no deben utilizarse

juntos.

• Para el ensayo debe usarse agua desmineralizada o agua de la misma

calidad.

2 PrioCHECK™ Porc. Salmonella Ab 2.0 Strip Kit Instrucciones de Uso

Soluciones que debe tener preparadas antes de comenzar

Tampón de dilución: solución de trabajo

El tampón de dilución (componente 3) debe ser diluido 5 veces en agua

desmineralizada o destilada. Para realizar un ensayo con una sola placa,

preparar 45 mL (añadir 9 mL de tampón de dilución (5x) a 36 mL de agua

desmineralizada o destilada).

Estabilidad de la solución de trabajo del tampón de dilución: 24 horas a

22±3°C.

Dilución de conjugado

Preparar la dilución del conjugado (componente 2) en solución de trabajo

del tampón de dilución. Para realizar un ensayo con una sola placa,

preparar 12 mL (añadir 0.4 mL de conjugado concentrado (30x) a 11.6 mL

de tampón de dilución).

Nota: El conjugado diluido es estable hasta 24 hs.

Solución de lavado

El líquido de lavado (componente 4) se debe diluir (100x) en agua

desmineralizada y es suficiente para un volumen final de 6 litros. Para

realizar un ensayo con una placa, preparar 500 mL (añadir 5 mL de solución

de lavado (100x) a 495 mL de agua desmineralizada o destilada).

Estabilidad de la solución de lavado: 1 semana guardada a 22±3°C.

Pre-dilución de muestras para el ensayo 20x en una placa de

dilución

1. Dispense 10 µl de cada muestra de prueba en los pocillos adecuados de

la placa de dilución (consulte la Tabla 1), dependiendo de los requisitos

del experimento.

Nota: Las muestras de prueba se pueden añadir a un pocillo (una

prueba) o a dos pocillos adyacentes (prueba duplicada).

2. Dispense 190 µl del tampón de dilución (solución de trabajo) a cada

pocillo que contenga una muestra y, a continuación, mezcle el

contenido de los pocillos.

3. Agite la placa o placas de dilución durante 1 minuto a 700 RPM (1/min).

Nota: Mezclar la muestra con solución de trabajo del tampón de dilución

es esencial para el ensayo.

Incubación de muestras de control y de ensayo

Consulte en la Tabla 2 la disposición de la placa de ensayo recomendada.

1. Etiquetar cada tira de la placa de ensayo (componente 1) con un

rotulador.

2. Agregar 90 µL de solución de trabajo del tampón de dilución en todos

los pocillos de la placa de ensayo.

3. Transfiera 10 µl de cada muestra prediluida de la placa de dilución a los

pocillos correspondientes de la placa de ensayo.

4. Agregar 10 µL del control negativo (componente 5) a pocillos A1 y B1.

5. Agregar 10 µL del control positivo (componente 7) a pocillos C1 y D1.

6. (Opcional) Agregar 10 µL del control de validación (componente 6) a

pocillos E1 y F1.

7. Agite la placa o placas durante 1 minuto a 700 RPM (1/min).

8. Incubar la(s) placa(s) de ensayo por 30±3 minutos a temperatura

ambiente (22±3°C).

Incubación con conjugado

1. Vaciar la placa de ensayo y lavar la placa 3 veces con 300 µL de líquido

de lavado diluido. Sacuda la placa firmemente después del último ciclo

de lavado.

2. Distribuya 100 µL de la solución de trabajo del conjugado en todos los

pocillos.

3. Incubar la placa durante 30±3 minutos a temperatura ambiente 22±3°C.

Incubación con sustrato cromogénico (TMB)

1. Vaciar la placa de ensayo de tiras y lavar la placa 3 veces con 300 µL de

líquido de lavado diluido. Sacuda la placa firmemente después del

último ciclo de lavado.

2. Distribuya 100 µL de sustrato cromogénico (TMB) (componente 8) en

todos los pocillos.

3. Incubar la placa durante 15±1 minutos a 22±3°C.

4. Agregar 100 µL de solución de frenado (componente 9) a todos los

pocillos.

5. Mezclar el contenido de los pocillos de la placa.

Nota: Iniciar el agregado de solución de frenado 15 minutos después de

haber llenado el primer pocillo con sustrato cromogénico (TMB). Agregar la

solución de frenado en el mismo orden y con el mismo ritmo con el que se

distribuyó que el sustrato cromogénico (TMB).

Lectura del ensayo y cálculo de los resultados

1. Medir la densidad óptica (OD) de los pocillos a 450 nm, preferentemente

dentro de los 15 minutos después de que se detuvo el desarrollo de color.

2. Calcular el valor principal OD450 del control positivo (pocillos C1 y D1).

3. Calcular el valor principal OD450 del control negativo (pocillos A1 y B1).

4. Calcule el valor corregido de la OD450 del control positivo, el control de

validación (si se utilizara) y de todas las muestras sustrayendo la OD450

media del control negativo (pocillos A1 y B1).

5. Calcular la positividad porcentual (PP) de todos los controles y de las

muestras de ensayo conforme a la siguiente fórmula.

La OD450 de todas las muestras está expresada como positividad porcentual

(PP) de la OD450 del control positivo (PC) (pocillos C1 y D1) corregida con la

OD450 principal del control negativo (NC) (pocillos A1 y B1).

PP =  OD450 muestra de ensayo - OD450 principal NC

OD450 PC - OD450 principal NC × 120 

Interpretación de resultados

Criterios de validación

1. La OD450 media del control negativo (pocillos A1 y B1) debe ser <0.4.

2. La OD450 media del control positivo (no corregida) debe ser >1.0.

3. Si se utilizó el control de validación, la positividad porcentual del

control de validación debe ser ≥60.

No satisfacer estos criterios es razón para descartar los resultados de esa

placa de ensayo específica.

Nota: Si la OD450 del control positivo (no corregida) es inferior a 1.0,

posiblemente el sustrato cromogénico (TMB) esté demasiado frío. En ese

caso, calentar la solución a 22±3°C o incubar hasta 30 minutos.

Interpretación de la positividad porcentual

PP = <40% Negativa

Hay ausencia de anticuerpos específicos contra

Salmonella

en la muestra para ensayo.

PP = ≥40% Positiva

Hay presencia de anticuerpos específicos contra

Salmonella

en la muestra para ensayo.

En programas avanzados de control de Salmonella, el ensayo puede ser

usado con un punto de corte diferente (p.ej., 20% PP). Queda bajo la

responsabilidad de las respectivas autoridades/usuarios implementar estos

puntos de corte.

Disposiciones de placa recomendadas

Las siguientes disposiciones de placa permiten una transferencia eficaz de

las muestras prediluidas de la placa de dilución a la placa de ensayo

(X - Vacío; S - Muestra; P - Control positivo; N - Control negativo;

V - Control de validación [opcional]).

Tabla 1 Disposición de la placa de dilución

X or S(1)

(1) Si utiliza el control de validación, deje los pocillos E1 y F1 vacíos.

Tabla 2 Disposición de la placa de pruebas

V or S

Referencias

1. Nielsen B, Baggesen D, Bager F, Haugegaard J, Lind P (1995). Veterinary

Microbiology 47:205–218.

2. Van der Heijden HMF (2001). First International Ring Trial of ELISA’s

for Salmonella-antibody. Berl Münch Tierärztl Wschr 389–392.

thermofisher.com/support | thermofisher.com/askaquestion

thermofisher.com

29 octubre 2020

Asistencia al cliente y soporte técnico

Asistencia técnica: visite thermofisher.com/askaquestion

Visite thermofisher.com/support para conocer lo último en servicios y

asistencia, incluyendo lo siguiente:

• Números de teléfono de contacto de todo el mundo

• Pedidos y soporte web

• Guías de usuario, manuales y protocolos

• Certificados de análisis

• Fichas técnicas de seguridad (Safety Data Sheets, SDS; también

conocidas como MSDS)

NOTA: Para conocer las SDS de los reactivos y productos químicos de

otros fabricantes, póngase en contacto con el fabricante.

Garantía limitada del producto

Life Technologies Corporation y/o su(s) filiale(s) garantizan sus productos

tal y como se establece en los términos y condiciones generales de venta de

Life Technologies, que se pueden encontrar en el sitio web de

Life Technologies www.thermofisher.com/us/en/home/global/

terms-and-conditions. Si tiene alguna duda, póngase en contacto con

Life Technologies en thermofisher.com/support.

Prionics Lelystad B.V. | Platinastraat 33 | 8211 AR Lelystad | The Netherlands

La información incluida en esta guía está sujeta a cambios sin previo aviso.

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DERIVADOS DE ESTE DOCUMENTO, INCLUYENDO EL USO DEL MISMO.

Historial de revisiones: N.º de Pub. MAN0013916 (Español)

Rev.

Fecha

Descripción

B.0 29 octubre 2020

• Se ha actualizado el protocolo para el uso del control de validación

opcional.

• Se ha añadido una sección con las disposiciones de placa

recomendadas.

A.0 25 julio 2019

• Documento nuevo. Se ha convertido el documento anterior

(MAN0013916 PrioCHECK Salmonella Ab porcine 2.0 serum 5 plt

7610660 v1.2_es_160621-ESL_final.docx) a la plantilla del documento

actual, con actualizaciones asociadas a la información sobre la

licencia limitada, la garantía, las marcas comerciales y logotipos.

•El nombre del producto ha cambiado de PrioCHECK Salmonella Ab

porcine 2.0 a PrioCHECK Porc. Salmonella Ab 2.0 Strip Kit.

Información importante sobre licencias: Este producto puede estar cubierto por una o más licencias

de etiquetado de uso limitado. Mediante el uso de este producto, acepta los términos y condiciones

de todas las licencias de etiquetado de uso limitado aplicables.

propiedad de Thermo Fisher Scientific y sus subsidiarias a menos que se especifique lo contrario.

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