3M Allergen Protein ELISA Kit Instrucciones de operación

Tipo
Instrucciones de operación
(Español)
ES
1
Fecha de emisión: 2017-11
Instrucciones del Producto
Kit ELISA para Proteína de Nuez de Cajú (Anacardo)
Análisis de inmunoabsorción enzimática (ELISA) para el análisis cuantitativo de las proteínas de nuez de Cajú (ana-
cardo).
Descripción del producto y uso previsto
El Kit ELISA para Proteína de Nuez de Cajú (Anacardo) 3M™ está diseñado para la detección de proteínas de nuez de
Cajú (anacardo) en el agua de lavado nal del sistema cerrado de limpieza (CIP, por sus siglas en inglés), las muestras de
hisopado ambiental, ingredientes para producir alimentos y productos alimenticios procesados.
El Kit ELISA para Proteína de Nuez de Cajú (Anacardo) 3M usa una prueba ELISA sándwich. Las proteínas de nuez
de Cajú (anacardo) presentes en la muestra reaccionan con el anticuerpo anti-nuez de Cajú (anacardo), que se ha
absorbido en la supercie de los pocillos de microtitulación de poliestireno. Después de remover las proteínas libres
mediante lavado, se añaden los anticuerpos anti-nuez de Cajú (anacardo) conjugados con peroxidasa de rábano
(HRP, por sus siglas en inglés). Estos anticuerpos marcados con enzimas forman complejos con la proteína de nuez de
Cajú (anacardo) previamente unida. Después de un segundo paso de lavado, la enzima unida al inmunoabsorbente se
detecta mediante la adición de un sustrato cromogénico, 3,3’,5,5’-tetrametilbenzidina (TMB, por sus siglas en inglés).
El desarrollo de color de esta reacción enzimática varía directamente con la concentración de proteína de nuez de Cajú
(anacardo) en la muestra analizada. Por consiguiente, la absorbancia, a 450nm, indica la concentración de proteína de
nuez de Cajú (anacardo) en la muestra de prueba. La cantidad de proteína de nuez de Cajú (anacardo) en la muestra de
prueba se puede extrapolar a partir de la curva estándar, construida a partir de soluciones estándar de concentración
conocida y se ajusta para considerar la dilución de la muestra.
El Kit ELISA para Proteína de Nuez de Cajú (Anacardo) 3M está previsto para su uso en laboratorios por profesionales
capacitados en el empleo de técnicas de laboratorio. 3M no documentó el uso de este producto en otras industrias
que no sean la alimentaria o la de bebidas. Por ejemplo, 3M no documentó este producto para el análisis de muestras
clínicas, veterinarias, cosméticas o farmacéuticas. No se evaluó el Kit ELISA para Proteína de Nuez de Cajú (Anacardo)
3M con todos los posibles productos alimenticios, procesos de alimentos y protocolos de prueba.
El Kit ELISA para Proteína de Nuez de Cajú (Anacardo) 3M contiene 96 pocillos descritos en la Tabla 1.
Tabla 1. Componentes del kit
Artículo Identicación Preparación
(consulte la sección
Preparación de
Reactivos para
obtener información
detallada)
Almacenamiento Estabilidad
Pocillos del Kit ELISA
para Proteína de Nuez
de Cajú (Anacardo)
3M™
Una bolsa metálica con
una placa de 96 pocillos
removibles revestidos con
anticuerpos.
Listo para usar. A una
temperatura
de entre 2°C
y 8°C en una
bolsa metálica
sellada con
desecante.
Vuelva a sellar la
bolsa metálica con
los pocillos sin utilizar
y el desecante.
Almacene entre 2°C
y 8°C para mantener
la estabilidad hasta la
fecha de vencimiento
del kit.
3M™ Conjugado
de Nuez de Cajú
(Anacardo) HRP (10X)
Un vial con 1,5mL de
anticuerpo conjugado (10X)
de peroxidasa de rábano
(HRP) 10X.
Diluya en una
proporción de 1/10
inmediatamente antes
de usar para preparar
una solución de
trabajo 1X.
A una
temperatura
de entre 2°C
y 8°C en la
oscuridad.
El conjugado 10X es
estable hasta la fecha
de vencimiento del
kit.
3
(Español)
ES
2
Concentrado
Estándar de Proteína
de Nuez de Cajú
(Anacardo) 3M™
Un vial con una
concentración conocida de
proteína de nuez de Cajú
(anacardo).
Consulte la Sección
del Procedimiento
ELISA para conocer la
preparación estándar.
A una
temperatura
de entre 2°C
y 8°C. No
congelar.
El concentrado
Estándar de Proteína
de Nuez de Cajú
(Anacardo) 3M es
estable hasta la fecha
de vencimiento del
kit.
3M™ Diluyente (5X) Un frasco con 50mL de
Diluyente 5X.
Diluya en una
proporción de 1/5
inmediatamente antes
de usar para preparar
una solución de
trabajo 1X.
A una
temperatura
de entre 2°C y
8°C
La 3M Solución
Diluyente 5X es
estable hasta la fecha
de vencimiento del
kit.
Solución de Lavado
3M™ (20X)
Un frasco con 50mL de
Solución de Lavado 20X.
Diluya 1/20 para
preparar una solución
de trabajo 1X.
A una
temperatura
de entre 2°C
y 8°C tanto
para la solución
de trabajo 1X
como para el
concentrado de
la Solución de
Lavado 20X.
La Solución de
Lavado 3M 20X es
estable hasta la fecha
de vencimiento del
kit. La Solución de
Lavado 1X es estable
durante al menos
una semana desde la
preparación.
3M™ Solución
Amortiguadora de
Extracción E26 (4X)
Un frasco con 120mL de
solución amortiguadora de
extracción 4X.
Diluya 1/4 para
preparar una solución
de trabajo 1X. La
solución de trabajo se
debe calentar hasta
50°C o 60°C antes
de su uso.
Almacene tanto
para la solución
de trabajo
1X como el
concentrado de
la 3M Solución
Amortiguadora
de Extracción
4X a una
temperatura
de entre 2°C y
8°C.
La Solución
Amortiguadora
de Extracción 1X
y la 3M Solución
Amortiguadora de
Extracción 4X son
estables hasta la
fecha de vencimiento
del kit.
3M™ Solución
de Sustrato
Cromogénico
Un frasco con 12mL de
3,3’,5,5’-tetrametilbenzidina
(TMB).
Listo para usar. A una
temperatura
de entre 2°C
y 8°C en la
oscuridad.
Proteja de la luz.
La 3M Solución
de Sustrato
Cromogénico es
estable hasta la fecha
de vencimiento del
kit.
3M™ Solución de
Paro
Un frasco de 12mL de
ácido sulfúrico 0.3 M.
Listo para usar. A una
temperatura
de entre 2°C y
8°C
La 3M Solución
de Paro es estable
hasta la fecha de
vencimiento del kit.
Materiales no incluidos en el kit:
Pipetas de precisión y boquillas de la pipeta para recolectar entre 10 y 100L
Tubos de ensayo
Lavadora/aspiradora para la placa de microtitulación
Agua destilada o desionizada
Lector de placas de microtitulación
Elementos de laboratorio varios para la preparación de reactivos y soluciones amortiguadoras
(Español)
ES
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• Temporizador
Agitador mecánico
Baño de agua con agitación o incubadora con agitación
Agitadora orbital
Seguridad
El usuario debe leer, comprender y respetar toda la información de seguridad que se incluye en las instrucciones del Kit
ELISA para Proteína de Nuez de Cajú (Anacardo) 3M. Guarde las instrucciones de seguridad como referencia en el futuro.
ADVERTENCIA: Indica una situación peligrosa que, si no se evita, podría ocasionar la muerte o lesiones graves, y/o
daños materiales.
ATENCIÓN: Indica una situación potencialmente peligrosa que, si no se evita, podría ocasionar daños
materiales.
W ADVERTENCIA
Para reducir los riesgos asociados con la exposición a productos químicos:
Deseche según las normas y regulaciones locales, regionales, nacionales o industriales actuales.
El usuario debe capacitar al personal en las técnicas de prueba actuales adecuadas; por ejemplo, las Buenas
Prácticas de Laboratorio
1
o la norma ISO/IEC 17025
2
.
Siempre siga las prácticas de seguridad estándar de laboratorio, incluso el uso de la vestimenta protectora
adecuada y de la protección ocular mientras manipule reactivos.
Evite que la 3M Solución de Paro tenga contacto con la piel, consulte la Hoja de Datos de Seguridad para conocer
información de seguridad adicional.
Para reducir los riesgos asociados con los resultados falso negativos que conduzcan a la liberación del producto
contaminado:
Almacene el Kit ELISA para Proteína de Nuez de Cajú (Anacardo) 3M como se indica en el embalaje y en las
instrucciones del producto.
Use el Kit ELISA para Proteína de Nuez de Cajú (Anacardo) 3M con muestras ambientales y de alimentos validadas
internamente o por un tercero.
Siga el protocolo y realice las pruebas exactamente como se indica en las instrucciones del producto.
3M no documentó el uso del Kit ELISA para Proteína de Nuez de Cajú (Anacardo) 3M en otras industrias que no
sean la alimentaria o la de bebidas. Por ejemplo, 3M no documentó este producto para el análisis de muestras
clínicas, veterinarias, cosméticas o farmacéuticas.
Para reducir los riesgos asociados con los resultados incorrectos que conduzcan a la liberación del producto
contaminado:
Siempre use el Kit ELISA para Proteína de Nuez de Cajú (Anacardo) 3M antes de la fecha de vencimiento.
Siempre prepare las soluciones de trabajo usando los reactivos concentrados del Kit ELISA para Proteína de Nuez
de Cajú (Anacardo) 3M a una temperatura entre 20°C y 25°C.
No congele el Concentrado Estándar de Proteína de Nuez de Cajú (Anacardo) 3M.
Si la Solución de Sustrato Cromogénico se vuelve azul, no la use. Siga las Buenas Prácticas de Laboratorio
1
para
evitar la contaminación cruzada de la 3M Solución de Sustrato Cromogénico.
ATENCIÓN
Para reducir los riesgos relacionados con resultados incorrectos:
No se ha evaluado la estabilidad de la muestra después de las extracciones. El procedimiento ELISA se debe
realizar inmediatamente después de la extracción de la muestra.
Manipule los Estándares de Proteína de Nuez de Cajú (Anacardo) 3M siguiendo las Buenas Prácticas de
Laboratorio
1
para evitar la contaminación cruzada de las muestras.
Consulte la Hoja de Datos de Seguridad para obtener más información.
Si desea obtener información sobre la documentación del desempeño del producto, visite nuestro sitio web en
www.3M.com/foodsafety o comuníquese con su representante o distribuidor local de 3M.
Responsabilidad del usuario
Los usuarios son responsables de familiarizarse con las instrucciones e información del producto. Visite nuestro sitio
web en www.3M.com/foodsafety o póngase en contacto con su representante o distribuidor local de 3M para obtener
más información.
(Español)
ES
4
Como sucede con todos los métodos utilizados para el análisis de alimentos, la matriz de prueba puede inuir
en los resultados. Al seleccionar un método de prueba, es importante reconocer que factores externos tales como
los métodos de muestreo, los protocolos de prueba, la preparación de la muestra, la manipulación y la técnica de
laboratorio pueden afectar los resultados. La muestra de alimentos en sí misma puede inuir en los resultados.
Es responsabilidad del usuario seleccionar cualquier método o producto de prueba para evaluar un número de muestras
sucientes que satisfagan al usuario respecto a que el método de prueba elegido cumple con los criterios del usuario.
Además, es responsabilidad del usuario determinar que cualquier método de prueba y sus resultados cumplen con los
requisitos de sus clientes y proveedores.
Como sucede con cualquier método de prueba, los resultados obtenidos del uso de cualquier producto de 3M Food
Safety no constituyen una garantía de calidad de las matrices ni de los procesos analizados.
Limitación de garantías/recursos legales limitados
SALVO LO EXPRESAMENTE ESTIPULADO EN UNA SECCIÓN DE GARANTÍA LIMITADA O EN EL EMBALAJE DE
UN PRODUCTO ESPECÍFICO, 3M RENUNCIA A TODAS LAS GARANTÍAS EXPRESAS Y TÁCITAS INCLUIDA, ENTRE
OTRAS, CUALQUIER GARANTÍA DE COMERCIABILIDAD O IDONEIDAD PARA UN USO EN PARTICULAR. Si un
producto de 3M Food Safety es defectuoso, 3M o su distribuidor autorizado reemplazará el producto o reembolsará
el precio de compra del producto, a su elección. Estos son sus recursos exclusivos. Deberá noticar inmediatamente a
3M en un lapso de sesenta días a partir del descubrimiento de cualquier sospecha de defecto en un producto y devolver
dicho producto a 3M. Llame a Atención al Cliente (1-800-328-1671 en los EE. UU.) o a su representante ocial de 3M
Food Safety para obtener una Autorización de devolución de productos.
Limitación de la responsabilidad de 3M
3M NO SERÁ RESPONSABLE DE NINGUNA PÉRDIDA O DAÑO, YA SEA DIRECTO, INDIRECTO, ESPECIAL, DAÑOS
ACCIDENTALES O CONSECUENCIAS, INCLUIDOS ENTRE OTROS, LA PÉRDIDA DE BENEFICIOS. En ningún caso
la responsabilidad de 3M conforme a ninguna teoría legal excederá el precio de compra del producto supuestamente
defectuoso.
Almacenamiento y desecho
Almacene todos los componentes del Kit ELISA para Proteína de Nuez de Cajú (Anacardo) 3M a una temperatura de
entre 2°C y 8°C. No congelar. Almacene las soluciones de trabajo diluidas como se describe en la Tabla 1.
Los componentes del Kit ELISA para Proteína de Nuez de Cajú (Anacardo) 3M no se deben usar después de su fecha de
vencimiento. La fecha de vencimiento y el número de lote están impresos en la etiqueta externa de la caja.
Deseche según las normas y regulaciones locales, regionales, nacionales o industriales actuales.
Instrucciones de uso
Siga todas las instrucciones atentamente. De lo contrario, los resultados obtenidos podrían llegar a ser incorrectos.
Preparación de los reactivos
Lleve todos los reactivos a temperatura ambiente (entre 20°C y 25°C) antes de su uso. Use elementos de laboratorio
limpios para diluir y almacenar las soluciones de trabajo.
a. 3M Solución Amortiguadora de Extracción
Para preparar una Solución Amortiguadora de Extracción 1X, añada una parte de 3M Solución Amortiguadora de
Extracción (4X) y dilúyala en tres partes de agua desionizada o destilada. Precaliente la Solución Amortiguadora de
Extracción (1X) a una temperatura de entre 50°C y 60°C en un baño de agua o en una incubadora con agitación
antes de su uso. Cada muestra requiere 4,5mL de Solución Amortiguadora de Extracción 1X.
b. 3M Solución Diluyente
Para preparar una Solución Diluyente 1X, añada una parte de 3M Diluyente (5X) a cuatro partes de agua
desionizada o destilada. Cada muestra requiere un total de 4,5mL de Solución Diluyente 1X.
c. Solución de Lavado 3M
Para preparar una Solución de Lavado 1X, añada una parte de Solución de Lavado 3M (20X) a 19 partes de agua
desionizada o destilada. Cada pocillo 3M ELISA requiere aproximadamente 2,5mL de Solución de Lavado 1X.
Nota: Se puede producir la formación de cristales en la Solución de Lavado 3M (20X) cuando se la almacena a
una temperatura de entre 2°C y 8°C. Para disolver los cristales, caliente la Solución de Lavado 3M (20X) a una
temperatura de entre 30°C y 35°C en un baño de agua o incubadora antes de preparar la Solución de Lavado (1X).
(Español)
ES
5
d. 3M Conjugado de Nuez de Cajú (Anacardo) HRP
Para preparar el Conjugado de Nuez de Cajú (Anacardo) HRP 1X, añada una parte del Conjugado de Nuez de Cajú
(Anacardo) HRP 3M (10X) y dilúyalo en 9 partes de la Solución Diluyente 1X. Prepárelos inmediatamente antes de su
uso. Cada Pocillo ELISA 3M requiere 100L de Conjugado de Nuez de Cajú (Anacardo) HRP 1X.
Preparación de la Muestra
Nota: Todas las muestras se deben extraer con Solución Amortiguadora de Extracción 1X precalentada a una
temperatura de entre 50°C y 60°C.
1.1 Prepare la muestra para la extracción de proteína en un tubo de ensayo limpio o en un tubo desechable, como se
describe en la Tabla 2.
Tabla 2. Preparación de la muestra
Matriz de la muestra Tamaño de la
muestra
Dilución (1/10)
Alimentos sólidos 0,5g ± 0,02g Añada 4,5mL ± 0,09mL de Solución Amortiguadora de
Extracción 1X precalentada
Alimentos líquidos 0,5mL ±
0,01mL
Añada 4,5mL ± 0,09mL de Solución Amortiguadora de
Extracción 1X precalentada
Agua de lavado nal de la limpieza in situ
(CIP)
0,5mL ±
0,01mL
Añada 4,5mL ± 0,09mL de Solución Amortiguadora de
Extracción 1X precalentada
Sólido
Líquido
1.2 Incube las muestras diluidas en un baño de agua con agitación o en una incubadora con agitación a una
temperatura de entre 50°C y 60°C durante 25minutos ± 1minuto. Otra opción es dejar las muestras en un baño
de agua o incubadora a una temperatura de entre 50°C y 60°C y agitarlas manualmente durante 1minuto cada
5minutos.
1.3 Después de la incubación, centrifugue las muestras a entre 5000rpm y 7000rpm (3000 x g) durante 20 o 30
segundos para disolver las partículas, o permita que se asienten durante 5minutos en un soporte para tubos de ensayo.
1.4 Tome 100L de la capa media (acuosa) y añádalos a 900L de la Solución Diluyente (1X). Use un generador de
vórtice o agite para mezclarlo bien. (Esto corresponde a una dilución 1/100 de la muestra original).
(Español)
ES
6
o
50-60 °C
00:25:00
o
3000 g/00:00:30
00:05:00
Procedimiento ELISA
2.1 Retire un Pocillo 3M ELISA por muestra o estándar y coloque los pocillos en el soporte. Vuelva a colocar los
Pocillos 3M ELISA que no fueron utilizados en la bolsa metálica, vuelva a sellarla y guárdela a una temperatura de
entre 2°C y 8°C.
2.2 Utilizando el Concentrado Estándar para Proteína de Nuez de Cajú (Anacardo) 3M, prepare un conjunto de cuatro
estándares diluidos en la Solución Diluyente (1X).
Número del
Estándar
Concentración del Estándar
(ng/mL)
Volumen del estándar
agregado al Diluyente 1X
Volumen de la solución
Diluyente 1X
4 243 10L del Concentrado Estándar
de Proteína de Nuez de Cajú
(Anacardo) 3M
990 L
3 81 200L del estándar número 4 400 L
2 27 200L del estándar número 3 400 L
1 9 200L del estándar número 2 400 L
0 0 0 400 L
2.3 Pipetee 100L de cada estándar en Pocillos 3M ELISA.
Estándar 0 (Solución Diluyente 1X)
Estándar 1 (9 ng/mL) ppb
Estándar 2 (27 ng/mL) ppb
Estándar 3 (81 ng/mL) ppb
Estándar 4 (243 ng/mL) ppb
2.4 Pipetee 100L de la muestra extraída preparada en 1,4 en un Pocillo 3M ELISA.
2.5 Incube los Pocillos 3M ELISA en un agitador orbital congurado a 400rpm a temperatura ambiente (entre 20°C y
25°C) durante 30minutos ± 2minutos. Mantenga los pocillos cubiertos y nivelados durante este paso para evitar
la evaporación.
2.6 Después de la incubación, aspire el contenido de los Pocillos 3M ELISA.
2.7 Llene por completo cada Pocillo 3M ELISA con Solución de Lavado 1X y aspírela. Si el lavado se hace
manualmente, invierta la placa y viértala/agítela para extraer el contenido en un recipiente para desechos y dele un
golpe seco a los pocillos contra papel absorbente para eliminar la solución de lavado residual. Repita este paso tres
veces para completar un total de cuatro lavados.
(Español)
ES
7
2.8 Pipetee 100L de Conjugado de Nuez de Cajú (Anacardo) HRP 1X en cada Pocillo 3M ELISA. Incube en un
agitador orbital congurado a 400rpm a temperatura ambiente durante 10minutos ± 2minutos. Durante este
paso, conserve la placa cubierta en la oscuridad y nivelada.
2.9 Repita los pasos 2.6 y 2.7 para completar un total de cuatro lavados con la Solución de Lavado (1X).
2.10 Pipetee 100L de la Solución de Sustrato Cromogénico 3M (TMB) en cada Pocillo 3M ELISA.
2.11 Incube en un agitador orbital congurado a 400rpm a temperatura ambiente durante 10minutos. Durante este
paso, conserve la placa cubierta en la oscuridad y nivelada.
2.12 Después de la incubación, añada 100L de la 3M Solución de Paro en cada Pocillo 3M ELISA y determine la
absorbancia (a 450nm) en un plazo de 30minutos.
00:30:00/temperatura ambiente
00:10:00/temperatura ambiente
00:10:00/temperatura ambiente
(Español)
ES
8
Análisis del Resultado
3.1 Reste el valor de fondo promedio para cada muestra. (Lectura promedio de absorbancia de la muestra menos la
lectura de absorbancia promedio del estándar cero).
3.2 Usado un software informático capaz de generar un ajuste curvilíneo logístico de cuatro parámetros, trace una
curva estándar representando la concentración en ng/mL (ppb) en el eje X y la lectura de absorbancia para cada
estándar correspondiente en el eje Y. También se podría utilizar un ajuste curvilíneo polinómico de segundo orden
(cuadrático) o de otro tipo. Sin embargo, sería un ajuste menos preciso de los datos.
3.3 Calcule las concentraciones de la muestra de la curva estándar; la unidad resultante es ng/mL(ppb). Luego,
multiplíquelo por el factor de dilución de la muestra para obtener la concentración de la muestra original. Por
ejemplo, si la dilución total de la muestra es 1/100 y la concentración de muestra de la curva estándar es 200ng/
mL (ppb), la concentración nal de la muestra es 200ng/mL x 100 = 20000ng/mL (ppb) que es 20g/mL (ppm).
Características mínimas de rendimiento
a. El Límite de Detección (LOD, por sus siglas en inglés) analítica es de 2,6 ng/mL (ppb).
Se dene el límite de detección como la menor concentración del alérgeno en una muestra de prueba que se
pueda distinguir de una verdadera muestra en blanco en un nivel de probabilidad especicado
3
. Se lo determina
añadiendo tres desviaciones estándar al valor medio de la densidad óptica de cuarenta y ocho duplicados de
estándar cero y calcular la concentración correspondiente.
b. El Límite de Cuanticación (LOQ, por sus siglas en inglés) es 0,9ppm.
Se dene el límite de cuanticación como el menor nivel del alérgeno en una muestra de prueba que se pueda
cuanticar razonablemente con un nivel de precisión especicado
3
.
Precisión
Precisión dentro del ensayo Promedio %CV = <10 N=12
Precisión entre ensayos Promedio %CV = <10 N=12
Especicidad y reactividad cruzada
Este ensayo reconoce la proteína de nuez de Cajú (anacardo) y se lo analizó en comparación con varias muestras para
establecer la reactividad cruzada (Tabla 3).
Tabla 3. Reactividad cruzada del Kit ELISA para Proteína de Nuez de Cajú (Anacardo) 3M.
Muestra de la matriz % de reactividad cruzada
Harina de almendra <1%
Leche de almendra <1%
BLG <1%
Caseína bovina <1%
Leche bovina <1%
Nuez de Brasil <1%
Harina de trigo sarraceno <1%
Anacardo/castaña de cajú (+)
Apio <1%
Garbanzo <1%
Harina de coco <1%
Leche de coco <1%
Harina de maíz <1%
Parvalbúmina de pescado <1%
Avellana <1%
Frijoles de Lima <1%
Nuez de Macadamia <1%

Transcripción de documentos

ES 3 (Español) Fecha de emisión: 2017-11 Instrucciones del Producto Kit ELISA para Proteína de Nuez de Cajú (Anacardo) Análisis de inmunoabsorción enzimática (ELISA) para el análisis cuantitativo de las proteínas de nuez de Cajú (anacardo). Descripción del producto y uso previsto El Kit ELISA para Proteína de Nuez de Cajú (Anacardo) 3M™ está diseñado para la detección de proteínas de nuez de Cajú (anacardo) en el agua de lavado final del sistema cerrado de limpieza (CIP, por sus siglas en inglés), las muestras de hisopado ambiental, ingredientes para producir alimentos y productos alimenticios procesados. El Kit ELISA para Proteína de Nuez de Cajú (Anacardo) 3M usa una prueba ELISA sándwich. Las proteínas de nuez de Cajú (anacardo) presentes en la muestra reaccionan con el anticuerpo anti-nuez de Cajú (anacardo), que se ha absorbido en la superficie de los pocillos de microtitulación de poliestireno. Después de remover las proteínas libres mediante lavado, se añaden los anticuerpos anti-nuez de Cajú (anacardo) conjugados con peroxidasa de rábano (HRP, por sus siglas en inglés). Estos anticuerpos marcados con enzimas forman complejos con la proteína de nuez de Cajú (anacardo) previamente unida. Después de un segundo paso de lavado, la enzima unida al inmunoabsorbente se detecta mediante la adición de un sustrato cromogénico, 3,3’,5,5’-tetrametilbenzidina (TMB, por sus siglas en inglés). El desarrollo de color de esta reacción enzimática varía directamente con la concentración de proteína de nuez de Cajú (anacardo) en la muestra analizada. Por consiguiente, la absorbancia, a 450 nm, indica la concentración de proteína de nuez de Cajú (anacardo) en la muestra de prueba. La cantidad de proteína de nuez de Cajú (anacardo) en la muestra de prueba se puede extrapolar a partir de la curva estándar, construida a partir de soluciones estándar de concentración conocida y se ajusta para considerar la dilución de la muestra. El Kit ELISA para Proteína de Nuez de Cajú (Anacardo) 3M está previsto para su uso en laboratorios por profesionales capacitados en el empleo de técnicas de laboratorio. 3M no documentó el uso de este producto en otras industrias que no sean la alimentaria o la de bebidas. Por ejemplo, 3M no documentó este producto para el análisis de muestras clínicas, veterinarias, cosméticas o farmacéuticas. No se evaluó el Kit ELISA para Proteína de Nuez de Cajú (Anacardo) 3M con todos los posibles productos alimenticios, procesos de alimentos y protocolos de prueba. El Kit ELISA para Proteína de Nuez de Cajú (Anacardo) 3M contiene 96 pocillos descritos en la Tabla 1. Tabla 1. Componentes del kit Artículo Identificación Preparación (consulte la sección Preparación de Reactivos para obtener información detallada) Almacenamiento Estabilidad Pocillos del Kit ELISA para Proteína de Nuez de Cajú (Anacardo) 3M™ Una bolsa metálica con una placa de 96 pocillos removibles revestidos con anticuerpos. Listo para usar. A una temperatura de entre 2 °C y 8 °C en una bolsa metálica sellada con desecante. Vuelva a sellar la bolsa metálica con los pocillos sin utilizar y el desecante. Almacene entre 2 °C y 8 °C para mantener la estabilidad hasta la fecha de vencimiento del kit. 3M™ Conjugado de Nuez de Cajú (Anacardo) HRP (10X) Un vial con 1,5 mL de anticuerpo conjugado (10X) de peroxidasa de rábano (HRP) 10X. Diluya en una proporción de 1/10 inmediatamente antes de usar para preparar una solución de trabajo 1X. A una temperatura de entre 2 °C y 8 °C en la oscuridad. El conjugado 10X es estable hasta la fecha de vencimiento del kit. 1 ES (Español) Concentrado Estándar de Proteína de Nuez de Cajú (Anacardo) 3M™ Un vial con una concentración conocida de proteína de nuez de Cajú (anacardo). Consulte la Sección del Procedimiento ELISA para conocer la preparación estándar. A una temperatura de entre 2 °C y 8 °C. No congelar. El concentrado Estándar de Proteína de Nuez de Cajú (Anacardo) 3M es estable hasta la fecha de vencimiento del kit. 3M™ Diluyente (5X) Un frasco con 50 mL de Diluyente 5X. Diluya en una proporción de 1/5 inmediatamente antes de usar para preparar una solución de trabajo 1X. A una temperatura de entre 2 °C y 8 °C La 3M Solución Diluyente 5X es estable hasta la fecha de vencimiento del kit. Solución de Lavado 3M™ (20X) Un frasco con 50 mL de Solución de Lavado 20X. Diluya 1/20 para preparar una solución de trabajo 1X. A una temperatura de entre 2 °C y 8 °C tanto para la solución de trabajo 1X como para el concentrado de la Solución de Lavado 20X. La Solución de Lavado 3M 20X es estable hasta la fecha de vencimiento del kit. La Solución de Lavado 1X es estable durante al menos una semana desde la preparación. 3M™ Solución Amortiguadora de Extracción E26 (4X) Un frasco con 120 mL de solución amortiguadora de extracción 4X. Diluya 1/4 para preparar una solución de trabajo 1X. La solución de trabajo se debe calentar hasta 50 °C o 60 °C antes de su uso. Almacene tanto para la solución de trabajo 1X como el concentrado de la 3M Solución Amortiguadora de Extracción 4X a una temperatura de entre 2 °C y 8 °C. La Solución Amortiguadora de Extracción 1X y la 3M Solución Amortiguadora de Extracción 4X son estables hasta la fecha de vencimiento del kit. 3M™ Solución de Sustrato Cromogénico Un frasco con 12 mL de 3,3’,5,5’-tetrametilbenzidina (TMB). Listo para usar. A una temperatura de entre 2 °C y 8 °C en la oscuridad. Proteja de la luz. La 3M Solución de Sustrato Cromogénico es estable hasta la fecha de vencimiento del kit. 3M™ Solución de Paro Un frasco de 12 mL de ácido sulfúrico 0.3 M. Listo para usar. A una temperatura de entre 2 °C y 8 °C La 3M Solución de Paro es estable hasta la fecha de vencimiento del kit. Materiales no incluidos en el kit: • • • • • • Pipetas de precisión y boquillas de la pipeta para recolectar entre 10 y 100 μL Tubos de ensayo Lavadora/aspiradora para la placa de microtitulación Agua destilada o desionizada Lector de placas de microtitulación Elementos de laboratorio varios para la preparación de reactivos y soluciones amortiguadoras 2 ES • • • • (Español) Temporizador Agitador mecánico Baño de agua con agitación o incubadora con agitación Agitadora orbital Seguridad El usuario debe leer, comprender y respetar toda la información de seguridad que se incluye en las instrucciones del Kit ELISA para Proteína de Nuez de Cajú (Anacardo) 3M. Guarde las instrucciones de seguridad como referencia en el futuro. ADVERTENCIA: ATENCIÓN: Indica una situación peligrosa que, si no se evita, podría ocasionar la muerte o lesiones graves, y/o daños materiales. Indica una situación potencialmente peligrosa que, si no se evita, podría ocasionar daños materiales. W ADVERTENCIA Para reducir los riesgos asociados con la exposición a productos químicos: • Deseche según las normas y regulaciones locales, regionales, nacionales o industriales actuales. • El usuario debe capacitar al personal en las técnicas de prueba actuales adecuadas; por ejemplo, las Buenas Prácticas de Laboratorio1 o la norma ISO/IEC 170252. • Siempre siga las prácticas de seguridad estándar de laboratorio, incluso el uso de la vestimenta protectora adecuada y de la protección ocular mientras manipule reactivos. • Evite que la 3M Solución de Paro tenga contacto con la piel, consulte la Hoja de Datos de Seguridad para conocer información de seguridad adicional. Para reducir los riesgos asociados con los resultados falso negativos que conduzcan a la liberación del producto contaminado: • Almacene el Kit ELISA para Proteína de Nuez de Cajú (Anacardo) 3M como se indica en el embalaje y en las instrucciones del producto. • Use el Kit ELISA para Proteína de Nuez de Cajú (Anacardo) 3M con muestras ambientales y de alimentos validadas internamente o por un tercero. • Siga el protocolo y realice las pruebas exactamente como se indica en las instrucciones del producto. • 3M no documentó el uso del Kit ELISA para Proteína de Nuez de Cajú (Anacardo) 3M en otras industrias que no sean la alimentaria o la de bebidas. Por ejemplo, 3M no documentó este producto para el análisis de muestras clínicas, veterinarias, cosméticas o farmacéuticas. Para reducir los riesgos asociados con los resultados incorrectos que conduzcan a la liberación del producto contaminado: • Siempre use el Kit ELISA para Proteína de Nuez de Cajú (Anacardo) 3M antes de la fecha de vencimiento. • Siempre prepare las soluciones de trabajo usando los reactivos concentrados del Kit ELISA para Proteína de Nuez de Cajú (Anacardo) 3M a una temperatura entre 20 °C y 25 °C. • No congele el Concentrado Estándar de Proteína de Nuez de Cajú (Anacardo) 3M. • Si la Solución de Sustrato Cromogénico se vuelve azul, no la use. Siga las Buenas Prácticas de Laboratorio1 para evitar la contaminación cruzada de la 3M Solución de Sustrato Cromogénico. ATENCIÓN Para reducir los riesgos relacionados con resultados incorrectos: • No se ha evaluado la estabilidad de la muestra después de las extracciones. El procedimiento ELISA se debe realizar inmediatamente después de la extracción de la muestra. • Manipule los Estándares de Proteína de Nuez de Cajú (Anacardo) 3M siguiendo las Buenas Prácticas de Laboratorio1 para evitar la contaminación cruzada de las muestras. Consulte la Hoja de Datos de Seguridad para obtener más información. Si desea obtener información sobre la documentación del desempeño del producto, visite nuestro sitio web en www.3M.com/foodsafety o comuníquese con su representante o distribuidor local de 3M. Responsabilidad del usuario Los usuarios son responsables de familiarizarse con las instrucciones e información del producto. Visite nuestro sitio web en www.3M.com/foodsafety o póngase en contacto con su representante o distribuidor local de 3M para obtener más información. 3 ES (Español) Como sucede con todos los métodos utilizados para el análisis de alimentos, la matriz de prueba puede influir en los resultados. Al seleccionar un método de prueba, es importante reconocer que factores externos tales como los métodos de muestreo, los protocolos de prueba, la preparación de la muestra, la manipulación y la técnica de laboratorio pueden afectar los resultados. La muestra de alimentos en sí misma puede influir en los resultados. Es responsabilidad del usuario seleccionar cualquier método o producto de prueba para evaluar un número de muestras suficientes que satisfagan al usuario respecto a que el método de prueba elegido cumple con los criterios del usuario. Además, es responsabilidad del usuario determinar que cualquier método de prueba y sus resultados cumplen con los requisitos de sus clientes y proveedores. Como sucede con cualquier método de prueba, los resultados obtenidos del uso de cualquier producto de 3M Food Safety no constituyen una garantía de calidad de las matrices ni de los procesos analizados. Limitación de garantías/recursos legales limitados SALVO LO EXPRESAMENTE ESTIPULADO EN UNA SECCIÓN DE GARANTÍA LIMITADA O EN EL EMBALAJE DE UN PRODUCTO ESPECÍFICO, 3M RENUNCIA A TODAS LAS GARANTÍAS EXPRESAS Y TÁCITAS INCLUIDA, ENTRE OTRAS, CUALQUIER GARANTÍA DE COMERCIABILIDAD O IDONEIDAD PARA UN USO EN PARTICULAR. Si un producto de 3M Food Safety es defectuoso, 3M o su distribuidor autorizado reemplazará el producto o reembolsará el precio de compra del producto, a su elección. Estos son sus recursos exclusivos. Deberá notificar inmediatamente a 3M en un lapso de sesenta días a partir del descubrimiento de cualquier sospecha de defecto en un producto y devolver dicho producto a 3M. Llame a Atención al Cliente (1-800-328-1671 en los EE. UU.) o a su representante oficial de 3M Food Safety para obtener una Autorización de devolución de productos. Limitación de la responsabilidad de 3M 3M NO SERÁ RESPONSABLE DE NINGUNA PÉRDIDA O DAÑO, YA SEA DIRECTO, INDIRECTO, ESPECIAL, DAÑOS ACCIDENTALES O CONSECUENCIAS, INCLUIDOS ENTRE OTROS, LA PÉRDIDA DE BENEFICIOS. En ningún caso la responsabilidad de 3M conforme a ninguna teoría legal excederá el precio de compra del producto supuestamente defectuoso. Almacenamiento y desecho Almacene todos los componentes del Kit ELISA para Proteína de Nuez de Cajú (Anacardo) 3M a una temperatura de entre 2 °C y 8 °C. No congelar. Almacene las soluciones de trabajo diluidas como se describe en la Tabla 1. Los componentes del Kit ELISA para Proteína de Nuez de Cajú (Anacardo) 3M no se deben usar después de su fecha de vencimiento. La fecha de vencimiento y el número de lote están impresos en la etiqueta externa de la caja. Deseche según las normas y regulaciones locales, regionales, nacionales o industriales actuales. Instrucciones de uso Siga todas las instrucciones atentamente. De lo contrario, los resultados obtenidos podrían llegar a ser incorrectos. Preparación de los reactivos Lleve todos los reactivos a temperatura ambiente (entre 20 °C y 25 °C) antes de su uso. Use elementos de laboratorio limpios para diluir y almacenar las soluciones de trabajo. a. 3M Solución Amortiguadora de Extracción Para preparar una Solución Amortiguadora de Extracción 1X, añada una parte de 3M Solución Amortiguadora de Extracción (4X) y dilúyala en tres partes de agua desionizada o destilada. Precaliente la Solución Amortiguadora de Extracción (1X) a una temperatura de entre 50 °C y 60 °C en un baño de agua o en una incubadora con agitación antes de su uso. Cada muestra requiere 4,5 mL de Solución Amortiguadora de Extracción 1X. b. 3M Solución Diluyente Para preparar una Solución Diluyente 1X, añada una parte de 3M Diluyente (5X) a cuatro partes de agua desionizada o destilada. Cada muestra requiere un total de 4,5 mL de Solución Diluyente 1X. c. Solución de Lavado 3M Para preparar una Solución de Lavado 1X, añada una parte de Solución de Lavado 3M (20X) a 19 partes de agua desionizada o destilada. Cada pocillo 3M ELISA requiere aproximadamente 2,5 mL de Solución de Lavado 1X. Nota: Se puede producir la formación de cristales en la Solución de Lavado 3M (20X) cuando se la almacena a una temperatura de entre 2 °C y 8 °C. Para disolver los cristales, caliente la Solución de Lavado 3M (20X) a una temperatura de entre 30 °C y 35 °C en un baño de agua o incubadora antes de preparar la Solución de Lavado (1X). 4 ES d. (Español) 3M Conjugado de Nuez de Cajú (Anacardo) HRP Para preparar el Conjugado de Nuez de Cajú (Anacardo) HRP 1X, añada una parte del Conjugado de Nuez de Cajú (Anacardo) HRP 3M (10X) y dilúyalo en 9 partes de la Solución Diluyente 1X. Prepárelos inmediatamente antes de su uso. Cada Pocillo ELISA 3M requiere 100 μL de Conjugado de Nuez de Cajú (Anacardo) HRP 1X. Preparación de la Muestra Nota: Todas las muestras se deben extraer con Solución Amortiguadora de Extracción 1X precalentada a una temperatura de entre 50 °C y 60 °C. 1.1 Prepare la muestra para la extracción de proteína en un tubo de ensayo limpio o en un tubo desechable, como se describe en la Tabla 2. Tabla 2. Preparación de la muestra Matriz de la muestra Tamaño de la muestra Dilución (1/10) Alimentos sólidos 0,5 g ± 0,02 g Añada 4,5 mL ± 0,09 mL de Solución Amortiguadora de Extracción 1X precalentada Alimentos líquidos 0,5 mL ± 0,01 mL Añada 4,5 mL ± 0,09 mL de Solución Amortiguadora de Extracción 1X precalentada Agua de lavado final de la limpieza in situ 0,5 mL ± (CIP) 0,01 mL Añada 4,5 mL ± 0,09 mL de Solución Amortiguadora de Extracción 1X precalentada Sólido Líquido 1.2 Incube las muestras diluidas en un baño de agua con agitación o en una incubadora con agitación a una temperatura de entre 50 °C y 60 °C durante 25 minutos ± 1 minuto. Otra opción es dejar las muestras en un baño de agua o incubadora a una temperatura de entre 50 °C y 60 °C y agitarlas manualmente durante 1 minuto cada 5 minutos. 1.3 Después de la incubación, centrifugue las muestras a entre 5000 rpm y 7000 rpm (3000 x g) durante 20 o 30 segundos para disolver las partículas, o permita que se asienten durante 5 minutos en un soporte para tubos de ensayo. 1.4 Tome 100 μL de la capa media (acuosa) y añádalos a 900 μL de la Solución Diluyente (1X). Use un generador de vórtice o agite para mezclarlo bien. (Esto corresponde a una dilución 1/100 de la muestra original). 5 ES (Español) 50-60 °C 00:25:00 o 00:05:00 o 3000 g/00:00:30 Procedimiento ELISA 2.1 Retire un Pocillo 3M ELISA por muestra o estándar y coloque los pocillos en el soporte. Vuelva a colocar los Pocillos 3M ELISA que no fueron utilizados en la bolsa metálica, vuelva a sellarla y guárdela a una temperatura de entre 2 °C y 8 °C. 2.2 Utilizando el Concentrado Estándar para Proteína de Nuez de Cajú (Anacardo) 3M, prepare un conjunto de cuatro estándares diluidos en la Solución Diluyente (1X). Número del Estándar Concentración del Estándar (ng/mL) Volumen del estándar agregado al Diluyente 1X Volumen de la solución Diluyente 1X 4 243 10 μL del Concentrado Estándar de Proteína de Nuez de Cajú (Anacardo) 3M 990 μL 3 81 200 μL del estándar número 4 400 μL 2 27 200 μL del estándar número 3 400 μL 1 9 200 μL del estándar número 2 400 μL 0 0 0 400 μL 2.3 Pipetee 100 μL de cada estándar en Pocillos 3M ELISA. • • • • • Estándar 0 (Solución Diluyente 1X) Estándar 1 (9 ng/mL) ppb Estándar 2 (27 ng/mL) ppb Estándar 3 (81 ng/mL) ppb Estándar 4 (243 ng/mL) ppb 2.4 Pipetee 100 μL de la muestra extraída preparada en 1,4 en un Pocillo 3M ELISA. 2.5 Incube los Pocillos 3M ELISA en un agitador orbital configurado a 400 rpm a temperatura ambiente (entre 20 °C y 25 °C) durante 30 minutos ± 2 minutos. Mantenga los pocillos cubiertos y nivelados durante este paso para evitar la evaporación. 2.6 Después de la incubación, aspire el contenido de los Pocillos 3M ELISA. 2.7 Llene por completo cada Pocillo 3M ELISA con Solución de Lavado 1X y aspírela. Si el lavado se hace manualmente, invierta la placa y viértala/agítela para extraer el contenido en un recipiente para desechos y dele un golpe seco a los pocillos contra papel absorbente para eliminar la solución de lavado residual. Repita este paso tres veces para completar un total de cuatro lavados. 6 ES (Español) 2.8 Pipetee 100 μL de Conjugado de Nuez de Cajú (Anacardo) HRP 1X en cada Pocillo 3M ELISA. Incube en un agitador orbital configurado a 400 rpm a temperatura ambiente durante 10 minutos ± 2 minutos. Durante este paso, conserve la placa cubierta en la oscuridad y nivelada. 2.9 Repita los pasos 2.6 y 2.7 para completar un total de cuatro lavados con la Solución de Lavado (1X). 2.10 Pipetee 100 μL de la Solución de Sustrato Cromogénico 3M (TMB) en cada Pocillo 3M ELISA. 2.11 Incube en un agitador orbital configurado a 400 rpm a temperatura ambiente durante 10 minutos. Durante este paso, conserve la placa cubierta en la oscuridad y nivelada. 2.12 Después de la incubación, añada 100 μL de la 3M Solución de Paro en cada Pocillo 3M ELISA y determine la absorbancia (a 450 nm) en un plazo de 30 minutos. 00:30:00/temperatura ambiente 00:10:00/temperatura ambiente 00:10:00/temperatura ambiente 7 ES (Español) Análisis del Resultado 3.1 Reste el valor de fondo promedio para cada muestra. (Lectura promedio de absorbancia de la muestra menos la lectura de absorbancia promedio del estándar cero). 3.2 Usado un software informático capaz de generar un ajuste curvilíneo logístico de cuatro parámetros, trace una curva estándar representando la concentración en ng/mL (ppb) en el eje X y la lectura de absorbancia para cada estándar correspondiente en el eje Y. También se podría utilizar un ajuste curvilíneo polinómico de segundo orden (cuadrático) o de otro tipo. Sin embargo, sería un ajuste menos preciso de los datos. 3.3 Calcule las concentraciones de la muestra de la curva estándar; la unidad resultante es ng/mL (ppb). Luego, multiplíquelo por el factor de dilución de la muestra para obtener la concentración de la muestra original. Por ejemplo, si la dilución total de la muestra es 1/100 y la concentración de muestra de la curva estándar es 200 ng/ mL (ppb), la concentración final de la muestra es 200 ng/mL x 100 = 20 000 ng/mL (ppb) que es 20 μg/mL (ppm). Características mínimas de rendimiento a. El Límite de Detección (LOD, por sus siglas en inglés) analítica es de 2,6 ng/mL (ppb). Se define el límite de detección como la menor concentración del alérgeno en una muestra de prueba que se pueda distinguir de una verdadera muestra en blanco en un nivel de probabilidad especificado3. Se lo determina añadiendo tres desviaciones estándar al valor medio de la densidad óptica de cuarenta y ocho duplicados de estándar cero y calcular la concentración correspondiente. b. El Límite de Cuantificación (LOQ, por sus siglas en inglés) es 0,9 ppm. Se define el límite de cuantificación como el menor nivel del alérgeno en una muestra de prueba que se pueda cuantificar razonablemente con un nivel de precisión especificado3. Precisión Precisión dentro del ensayo Promedio %CV = <10 N=12 Precisión entre ensayos Promedio %CV = <10 N=12 Especificidad y reactividad cruzada Este ensayo reconoce la proteína de nuez de Cajú (anacardo) y se lo analizó en comparación con varias muestras para establecer la reactividad cruzada (Tabla 3). Tabla 3. Reactividad cruzada del Kit ELISA para Proteína de Nuez de Cajú (Anacardo) 3M. Muestra de la matriz % de reactividad cruzada Harina de almendra <1 % Leche de almendra <1 % BLG <1 % Caseína bovina <1 % Leche bovina <1 % Nuez de Brasil <1 % Harina de trigo sarraceno <1 % Anacardo/castaña de cajú (+) Apio <1 % Garbanzo <1 % Harina de coco <1 % Leche de coco <1 % Harina de maíz <1 % Parvalbúmina de pescado <1 % Avellana <1 % Frijoles de Lima <1 % Nuez de Macadamia <1 % 8
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3M Allergen Protein ELISA Kit Instrucciones de operación

Tipo
Instrucciones de operación