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¿Son realmente útiles 20 000 aumentos en microscopía digital? Introducción Los microscopios digitales disponen únicamente de una cámara directrices prácticas respecto a cuál es el rango de aumentos para la observación de las imágenes y no incluyen oculares. útil en microscopía digital. Los microscopios con oculares para observación visual como, por ejemplo, los microscopios estereoscópicos, también pueden Definición de «aumento» equiparse con cámaras digitales. Ambos tipos de microscopios El aumento se define como la proporción entre el tamaño de se utilizan para diferentes aplicaciones en numerosos ámbitos una característica de un objeto vista en una imagen y el tamaño e industrias. real de la característica en cuestión. El aumento bidimensional lateral se puede determinar a partir de: Para evaluar el rendimiento de un microscopio óptico, es importante saber cuál es el máximo aumento que puede Aumento = alcanzar. En el caso de la microscopía digital, a menudo se mencionan valores de aumento muy elevados como, por ejemplo, de 20 000x. En este informe se ofrecen algunas Dimensiones de la característica en la imagen Dimensiones de la característica en el objeto real A continuación se muestran ejemplos de un microscopio digital y de un microscopio estereoscópico con oculares y cámara digital. Izquierda: Microscopio estereoscópico Leica M205 C con cámara digital Leica DFC450 C incorporada. La muestra de la hormiga se puede observar a través de los oculares o de un monitor de visualización (se muestran dos tamaños) para la detección de imágenes mediante la cámara. Derecha: Microscopio digital Leica DMS1000 en el que se utilizan diferentes tamaños de monitor para la visualización de imágenes. Monitor pequeño Chip cámara Oculares Monitor grande Hormiga (muestra) Izquierda: Taxus, sección transversal a –120 °C, analizado en un microscopio electrónico de barrido (SEM) con tratamiento criogénico www.leica-microsystems.com RANGO DE AUMENTOS ÚTIL EN MICROSCOPÍA DIGITAL Siempre se plantea la pregunta de si un nivel de 20 000x se modernos, muy por debajo de 1 mm. A un aumento alto encuentra sencillamente fuera del rango útil, lo que significa desde la muestra al chip de la cámara (de 150x, por ejemplo), que se trata de un aumento vacío con el que no es posible la resolución del sistema de microscopio viene determinada resolver detalles adicionales. ¿Qué determina qué rango por el límite de resolución óptica. El límite de resolución de aumentos es útil en microscopía digital cuando se observa óptica para altas aperturas numéricas (1.3) y la longitud una imagen a través de una pantalla o de un monitor? de onda reducida en el rango visible (400 nm) es de aproxi­ Existen dos factores principales: la resolución del sistema madamente 5400 pares de líneas/mm. El aumento máximo de microscopio y la distancia de visualización de la imagen. dentro del rango útil que se acaba de definir es 1800x. Resolución del sistema de microscopio La resolución del sistema en el caso de un microscopio digital o de un microscopio con oculares utilizado con una cámara digital está influenciada por tres factores principales: ›› la resolución óptica del objetivo, el zoom, el tubo y las lentes del soporte para cámara; ›› la resolución del sensor de imagen del chip de la cámara; ›› la resolución de visualización de imágenes del monitor electrónico A un aumento muy bajo (por ejemplo, inferior a 1x desde la muestra al chip de la cámara), la apertura numérica suele ser bastante reducida; no obstante, el límite de resolución de los chips de cámaras con tamaños de píxel superiores a 2 µm y de los monitores con tamaños de píxel superiores a 0.5 mm será normalmente inferior a la resolución óptica. Por tanto, a un aumento muy bajo, el límite de resolución del chip o del monitor es a menudo el factor dominante. Aumento vacío El límite de resolución del sistema de microscopio digital viene Siempre que el valor de aumento supera el rango de aumentos determinado por el más bajo de los tres valores de resolución útil en microscopía digital (1800x), se obtiene como resultado anteriores. un aumento vacío en el que la imagen se muestra a mayor tamaño, pero no es posible resolver detalles adicionales de la Rango de aumentos útil muestra. Un valor de 20 000x es muy superior a 1800x, por En primer lugar, se da por supuesto que la distancia de visuali­ lo que se tratará claramente de un aumento vacío. zación – la distancia entre los ojos del observador y la imagen visualizada – se encuentra siempre dentro del rango útil. Conclusión El rango útil de distancia de visualización se basa en una En el caso de los microscopios digitales, como sucede con referencia convencional de 25 cm, el punto medio más cercano otros microscopios ópticos, existe un claro límite en cuanto al en el que el ojo humano puede enfocar con claridad. El rango de aumentos útil en microscopía digital se puede definir como: Resolución del sistema Aumento Resolución del sistema < < útil 6 3 rango de aumentos útil. Si se supera dicho rango o, en otras palabras, si se utilizan más de 1800x, lo único que se obtendrá es un aumento vacío. Para comprender mejor cuál es el rango de aumentos útil en microscopía digital, consulte el informe técnico que se cita a continuación como lectura adicional. De este modo, el rango de aumentos útil se encuentra Lectura adicional compren­dido entre /6 y /3 de la resolución del sistema DeRose, J.A., Doppler, M.: What Does 30,000x Magnification Really Mean? Some de microscopio. Useful Guidelines for Understanding Magnification in Today’s New Digital Microscope 1 1 Los chips de las cámaras modernas presentan a menudo tamaños de píxel muy por debajo de 10 µm y, los monitores Era. Leica Science Lab, febrero de 2015 Autores: J.A. DeRose, M. Doppler, Leica Microsystems